1、目的:Fit<,3>基因是近年來在白血病研究中新發(fā)現(xiàn)的一種異常表達(dá)的基因，研究資料表明，F(xiàn)it<,3>基因有望成為白血病檢測的標(biāo)志性基因，本實(shí)驗(yàn)通過對不同類型白血病患者外周血Fit<,3>基因表達(dá)與突變的研究，探討Fit<,3>基因與白血病發(fā)生的相關(guān)性，以骨髓標(biāo)本對照，確定外周血Fit<,3>基因檢測白血病的新方法。 方法:從34例白血病患者和10名健康人外周血標(biāo)本中抽提總RNA，以反轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法擴(kuò)增

2、Fit<,3>基因和β-Actin基因，采用凝膠分析軟件對RT-PCR產(chǎn)物進(jìn)行半定量分析，比較兩組間差異。從外周血標(biāo)本中提取基因組DNA，聚合酶反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增Fit<,3>基因外顯子14-15，PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳純化后進(jìn)行DNA測序分析。 結(jié)果:Fit<,3>基因mRNA表達(dá)：在34例標(biāo)本中，19例急性髓系白血病患者有16例陽性(占84.2﹪)；6例急性淋巴細(xì)胞白血病有3例陽性(占50﹪)；5例慢性粒細(xì)胞白血病有2例陽性；2例

3、骨髓增生異常綜合征1例陽性；2例急性混合細(xì)胞白血病均陽性。Fit<,3>基因外顯子14-15突變：34例血樣標(biāo)本均擴(kuò)增出Fit<,3>基因外顯子14-15的靶基因片段，經(jīng)瓊脂糖電泳顯示3例陽性帶。選擇11例特征性標(biāo)本測定外顯子14-15的DNA序列，發(fā)現(xiàn)5例突變，其中2例為ITD，內(nèi)串聯(lián)復(fù)制重復(fù)序列分別為30bp和33bp，編碼10和11個(gè)氨基酸；3例均在近膜區(qū)(JM)外顯子14、L<,576P>發(fā)生點(diǎn)突變，其中1例伴有內(nèi)含子14缺失，

4、長度90bp。10名健康者標(biāo)本均為陰性。 結(jié)論:Fit<,3>基因異常與白血病發(fā)生、發(fā)展相關(guān)?；颊咄庵苎獦颖綟lt<,3>基因檢測可作為白血病的診斷，預(yù)后判斷分析和微小殘留病灶檢出的標(biāo)志性基因；急性非淋巴細(xì)胞性白血病患者Fit<,3>基因表達(dá)強(qiáng)弱與外周血白細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)(P<0.05)；FIt<,3>-ITD陽性患者化療緩解率低，易復(fù)發(fā)，預(yù)后差；近膜區(qū)(JM)外顯子14-L<,576P>突變點(diǎn)是否為Flt<,3>基因的一個(gè)新的突