1、目的:腦室下區(qū)(SVZ)是成年腦內(nèi)重要的神經(jīng)發(fā)生區(qū),NMDA受體是中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要的興奮性氨基酸受體。NMDA受體在SVZ區(qū)細(xì)胞的超微分布未見(jiàn)報(bào)道,鑒于此,本實(shí)驗(yàn)研究NMDA受體亞單位NR1、NR2A、NR2B在成年大鼠SVZ區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞上的超微分布。
　　 方法:取健康雄性成年SD大鼠,灌注固定,取腦,用同一固定液后固定,做50μm振動(dòng)切片,梯度蔗糖浸泡,液氮凍融處理后,室溫下兔血清封閉,應(yīng)用包埋前免疫電鏡雙技術(shù),nestin

2、免疫酶組織化學(xué)技術(shù)顯示神經(jīng)干細(xì)胞,免疫金-銀標(biāo)記法顯示NR1、NR2A、NR2B,之后取SVZ區(qū)免疫反應(yīng)陽(yáng)性部位的組織,經(jīng)系列脫水,置換,Epon812樹(shù)脂浸潤(rùn),包埋,聚合,修塊,做50nm超薄切片,經(jīng)醋酸鈾、枸櫞酸鉛雙重染色,透射電鏡觀察、拍照、圖像分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.Nestin免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物是黑色嗜鋨電子致密物,呈絮狀分布在成年大鼠SVZ區(qū)成神經(jīng)細(xì)胞(A型細(xì)胞)、星形膠質(zhì)細(xì)胞(B型細(xì)胞)、神經(jīng)前體細(xì)胞

3、(C型細(xì)胞)和室管膜上皮細(xì)胞(E型細(xì)胞)的胞漿內(nèi)。
　　 2.NR1、NR2A、NR2B免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物呈黑色顆粒狀,分布在成年大鼠腦SVZ區(qū)上述各型細(xì)胞以及毗鄰紋狀體中神經(jīng)元的胞膜上和胞漿內(nèi),且在胞漿內(nèi)的高爾基復(fù)合體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上可見(jiàn)金顆粒標(biāo)記。
　　 3.雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中,成年大鼠腦SVZ區(qū)上述四型細(xì)胞的胞漿內(nèi)均可見(jiàn)有NR1、NR2A、NR2B免疫金顆粒與nestin免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物的共表達(dá)。陰性對(duì)照未見(jiàn)任何標(biāo)記。