1、擴(kuò)張型心肌?。╠ilated cardiomyopathy DCM）在心肌病中最為常見，常發(fā)展為充血性心力衰竭，預(yù)后很差，心臟病學(xué)家們一直在尋找新的治療方法，干細(xì)胞移植是一個(gè)切實(shí)可行的增加成體心肌細(xì)胞的方法。脂肪問充質(zhì)干細(xì)胞（adipose tissue-derived mesenchymal stem cells，ADMSCs）具有多種分化潛能，將其植入損傷的心肌后，能夠在損傷區(qū)存活、增殖、并分化為心肌細(xì)胞，改善心功能。ADMSCs移

2、植在缺血性心臟病中的臨床應(yīng)用已經(jīng)初見曙光，但是在擴(kuò)張型心肌病等充血性心臟病方面尚屬空白。本研究為臨床應(yīng)用ADMSCs移植治療擴(kuò)張性心肌病提供實(shí)驗(yàn)與理論依據(jù)。
　　 目的：（一）經(jīng)腹腔注射阿霉素建立wistar大鼠擴(kuò)張型心肌病模型。（二）從wistar大鼠脂肪組織大量分離、培養(yǎng)ADMSCs，證明ADMSCs在5-氮雜胞苷（5-aza）誘導(dǎo)下可分化為心肌細(xì)胞，確定其是否可以作為一個(gè)合適的工具細(xì)胞，為后續(xù)研究做準(zhǔn)備。（三）將同種異體A

3、DMSCs移植入DCM大鼠心肌內(nèi)，觀察ADMSCs在心肌內(nèi)的存活及分化情況，比較移植前后心功能及血流動(dòng)力學(xué)的變化。
　　 內(nèi)容和方法：1.提取大鼠脂肪組織，體外分離培養(yǎng)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞ADMSCs，行細(xì)胞免疫組化檢測(cè)免疫表型。分析其表面CD13，CD34，CD44，CD45，CD105.2.研究wistar大鼠擴(kuò)張型心肌病模型建立的方法；參考國外學(xué)者的方法，并經(jīng)改良，通過大鼠腹腔注射一定劑量的阿霉素這種非手術(shù)方法建立慢性充血性心

4、衰的DCM動(dòng)物模型。最后通過心功能及病理切片檢測(cè)模型。3.將體外分離培養(yǎng)的ADMSCs移植入治療組DCM大鼠，同時(shí)將以相同體積的IMEM培養(yǎng)基移植入對(duì)照組DCM大鼠。術(shù)后4周，處死動(dòng)物留取心臟，于熒光顯微鏡下觀察ADMSCs植入后存活及分化情況。于細(xì)胞移植術(shù)前、術(shù)后4周，將兩組大鼠進(jìn)行超聲心動(dòng)、血流動(dòng)力學(xué)檢查，測(cè)定、比較心功能的指標(biāo)。
　　 結(jié)果：1.在制模過程中除死亡鼠外，所有大鼠均出現(xiàn)不同程度體重增長緩慢或體重下降、脫毛、精

5、神萎靡，個(gè)別大鼠出現(xiàn)眼角糜爛。隨機(jī)抽取5只大鼠處死，解剖心臟進(jìn)行病理學(xué)檢查。大體觀察心臟呈球形，室壁薄、心腔大。光鏡下觀察病理切片見心肌纖維肥大，胞腔內(nèi)空泡形成，纖維組織增多，局部心肌細(xì)胞溶解等現(xiàn)象。比較心功能指標(biāo)提示，造模后2周所有存活的大鼠均出現(xiàn)LVEDV及LVESV升高、左心室EF下降等心功能下降表現(xiàn)。2.從wistar大鼠脂肪組織分離培養(yǎng)出大量螺旋生長的長梭形細(xì)胞，多次傳代后，細(xì)胞呈均勻有序的向四周放射狀分布，細(xì)胞排列呈放射狀，

6、多數(shù)細(xì)胞為長梭形。這些細(xì)胞的細(xì)胞表面分子CD13、CD44、CD105皆陽性，CD34、CD45、Ⅷ因子、HLA-DR、VWF均陰性；具有成骨、成脂、成肌的多向分化能力?？梢栽隗w外連續(xù)傳代培養(yǎng)而保持穩(wěn)定的生長速度，第3至8代細(xì)胞倍增時(shí)間為55至63小時(shí)；經(jīng)2至4周液氮冷凍保存后復(fù)蘇存活率90％以上，細(xì)胞表面陽性標(biāo)志保持不變；3.移植術(shù)后4周，于移植部位可見DAPI標(biāo)記的ADMSCs，同時(shí)，免疫組織熒光染色發(fā)現(xiàn)部分DAPI陽性細(xì)胞TnT染

7、色也為陽性，且排列方向與心肌細(xì)胞一致。移植術(shù)后4周，對(duì)照組與ADMSCs治療組比較，左心室舒張末容積（LVEDV）及左心室收縮末容積（LVESV）減少（P<0.01），左心室每搏量（SV）、心臟射血分?jǐn)?shù)（EF）、左心室收縮壓（LVSP）、左心室室內(nèi)壓最大上升/下降速率（±dp/dtmax）均明顯增加（P<0.05～0.01）。
　　 結(jié)論：1.本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，阿霉素作用于wistar大鼠后，大體心臟觀察左心腔呈球形擴(kuò)大，超聲心

8、動(dòng)檢查室壁收縮動(dòng)度減弱，心室壁變薄，射血功能受損，說明DCM模型建立成功。2.通過胰酶消化的方法成功地從wistar大鼠脂肪組織分離培養(yǎng)出具有多向分化潛能的ADMSCs。分離的ADMSCs具有旁分泌功能，易于在體外長期傳代培養(yǎng)、大量擴(kuò)增、長期凍存。這些特征證明了ADMSCs作為細(xì)胞和基因工程備選種子細(xì)胞的基礎(chǔ)，也為ADMSCs進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究提供了一個(gè)理想的工具細(xì)胞。3.ADMSCs移植術(shù)后4周，治療組LVESP、左心室室內(nèi)壓（+dp/