1、目的：骨質(zhì)疏松癥(OP)是一種以骨量減少、骨微結(jié)構改變?yōu)樘卣鞯拇x骨疾病。在骨代謝中，雌激素和細胞生長因子具有重要作用。血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelialgrowth factor，VEGF)，既是血管生成因子，又是骨生長因子。它通過對成骨細胞及破骨細胞的增殖分化和活性的調(diào)節(jié)起作用。本實驗通過體外培養(yǎng)成骨細胞，然后以不同濃度雌激素干預24h后，應用免疫組織化學及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)方法觀察成骨細胞

2、VEGF表達情況，探討雌激素對成骨細胞上VEGF表達的影響。
　　 方法：選取新生48h大鼠六只，摘取顱蓋骨，經(jīng)酶解消化得到成骨細胞，并進行體外培養(yǎng)。通過堿性磷酸酶染色(ALP染色)和礦化結(jié)節(jié)染色完成成骨細胞的鑒定。取第4代成骨細胞，隨機分為5組，分別給予0 mol/L、10-10 mol/L，10-8 mol/L，10-6mol/L，104 mol/L17β-雌二醇干預。干預24h后，應用免疫組織化學及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(R

3、T-PCR)方法檢測VEGF表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.細胞形態(tài)觀察、細胞鑒定：倒置相差顯微鏡下見細胞接種后培養(yǎng)24h貼壁，細胞呈梭形，三角形和多角形等形態(tài)；堿性磷酸酶染色后，大多數(shù)細胞膜及胞漿中可見黑褐色顆粒。當細胞形成鈣化結(jié)節(jié)后，進行茜素紅染色，可見紅色結(jié)節(jié)。
　　 2.經(jīng)RT-PCR及免疫組織化學方法檢測表明，VEGF在原代成骨細胞內(nèi)穩(wěn)定表達；半定量分析證實，不同17β-雌二醇劑量組間VEGF的表達