環(huán)介導等溫擴增技術檢測單純皰疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型及人乳頭瘤病毒6型和11型的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:建立單純皰疹病毒(Herpes Simple Virus)Ⅰ型和Ⅱ型、人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus)6型和11型的LAMP檢測方法。
  方法:分別設計擴增各型病毒特異基因的LAMP引物,提取病毒DNA,配置LAMP反應體系,60~65℃保溫約60 min,完成對靶病原體基因的擴增,肉眼及電泳判定擴增結果。LAMP擴增產(chǎn)物經(jīng)酶切進一步鑒定;設立對照組,評價LAMP方法的特異性;10倍系列稀釋模板,檢

2、測LAMP技術的敏感性。
  結果:實驗組經(jīng)LAMP后,肉眼觀察到LAMP擴增產(chǎn)物的出現(xiàn),電泳后呈LAMP特征性梯狀條帶,對照組均無擴增產(chǎn)物;HSV及HPV LAMP擴增產(chǎn)物經(jīng)相應限制性內(nèi)切酶酶切鑒定正確,特異性實驗結果顯示與對照組無交叉反應,具有特異性;LAMP可檢測到單純皰疹病毒Ⅰ型、單純皰疹病毒Ⅱ型、人乳頭瘤病毒6型、人乳頭瘤病毒11型DNA的最低濃度分別是1 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL、1 pg/μL,其

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