1、目的：用肌醇六磷酸(Inosito.Hexaphosphate，IP6)作用于人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29不同時(shí)間，觀察IP6作用不同時(shí)間對(duì)HT-29細(xì)胞生物學(xué)行為的影響并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行探討。 方法：將3.3mmol/L的IP6作用于HT-29細(xì)胞不同時(shí)間(3d、6m、12m)，以未經(jīng)IP6作用的HT-29細(xì)胞作為對(duì)照，通過(guò)裸鼠體內(nèi)接種致瘤的方法觀察IP6對(duì)HT-29細(xì)胞致瘤性的影響；將3.3mmol/L的IP6作用于HT-29細(xì)

2、胞不同時(shí)間(3d、6m、12m)，以未經(jīng)IP6作用的HT-29細(xì)胞作為對(duì)照，應(yīng)用雙層軟瓊脂培養(yǎng)測(cè)定細(xì)胞克隆形成率的變化；分光光度法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)腸型堿性磷酸酶(IAP)和細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)乳酸脫氫酶(LDH)活性的改變；RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)bcl-2、c-My.mRNA的表達(dá)變化；免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)及細(xì)胞色素c(Cyt-c)表達(dá)的改變。 結(jié)果：裸鼠體內(nèi)移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，IP6作用組HT-29細(xì)胞裸鼠體

3、內(nèi)移植瘤的成瘤時(shí)間較對(duì)照組長(zhǎng)，成瘤率較對(duì)照組低，最終形成腫瘤的體積也明顯小于對(duì)照組，而且這些作用都表現(xiàn)出明顯的時(shí)間依賴(lài)性。雙層軟瓊脂培養(yǎng)結(jié)果表明，經(jīng)IP6作用的HT-29細(xì)胞的集落形成能力隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低，而克隆形成抑制率隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高。分光光度法結(jié)果顯示：各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)腸型ALP比活性與對(duì)照組相比均顯著升高(P<0.01)，且各實(shí)驗(yàn)組之間表現(xiàn)出明顯的時(shí)間依賴(lài)趨勢(shì)（各實(shí)驗(yàn)組之間相比均為P<0.05）；細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH

4、活性測(cè)定結(jié)果顯示各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活性均高于對(duì)照組且差別具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。隨著IP6作用時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)的LDH活性逐漸升高(各實(shí)驗(yàn)組之間相比均為P<0.05)。RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各IP6作用組bcl-2和c-My.mRNA表達(dá)均顯著降低，差別具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而且bcl-2和c-My.mRNA表達(dá)均表現(xiàn)出隨IP6作用時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低的趨勢(shì)。免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5、表明：不同作用時(shí)間的IP6均可抑制HT-29細(xì)胞內(nèi)的PCNA蛋白表達(dá)(P<0.05)，并且隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，PCNA蛋白的表達(dá)隨之降低（各IP6作用時(shí)間組之間相比均為P<0.05）；不同作用時(shí)間的IP6作用均可升高細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞色素.(Cyt-c)的水平（P<0.01），且隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)，Cyt-c蛋白的表達(dá)有升高的趨勢(shì)(各IP6作用時(shí)間組之間相比均為P<0.05)。 結(jié)論：1、IP6作用能夠使HT-29細(xì)胞裸鼠體內(nèi)致瘤能力的降

6、低，表現(xiàn)為成瘤時(shí)間延長(zhǎng)、成瘤體積減小及成瘤率降低，作用具有時(shí)間依賴(lài)趨勢(shì)。2、IP6能夠抑制HT-29細(xì)胞的增殖，使細(xì)胞克隆形成能力降低及細(xì)胞內(nèi)PCNA水平的降低，且隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)作用更加明顯。3、IP6具有促進(jìn)HT-29細(xì)胞分化的作用，這一作用表現(xiàn)在細(xì)胞集落形成能力的降低、細(xì)胞內(nèi)分化相關(guān)基因c-Myc表達(dá)的減低以及分化標(biāo)志酶--腸型堿性磷酸酶比活性的升高，作用表現(xiàn)出明顯的時(shí)間依賴(lài)趨勢(shì)。4、IP6可以促進(jìn)HT-29細(xì)胞發(fā)生凋亡，這一作用