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文檔簡介
1、目的:
研究14-3-3ε的表達水平對胃癌細胞SGC7901細胞增殖、周期及裸鼠皮下成瘤能力的影響及相關機制。
方法:
?、俨捎冒邢蚋蓴_14-3-3ε的shRNA轉(zhuǎn)染SGC7901胃癌細胞,用嘌呤霉素進行抗性篩選,挑選單克隆進行增殖培養(yǎng),用Western Blotting驗證14-3-3ε的表達,建立14-3-3ε穩(wěn)定低表達的細胞系(即轉(zhuǎn)染組)、對照組為轉(zhuǎn)染無干擾作用的shRNA的SGC7901胃癌細胞、未轉(zhuǎn)
2、染組為SGC7901胃癌細胞。
?、谟肕TT法檢測各組細胞的增殖能力,用流式細胞儀測定細胞周期,檢測各組細胞處于細胞分裂周期中不同時期的細胞百分比。
?、蹖⒓毎臃N于Balb-c裸鼠前腋部皮下,根據(jù)瘤體體積的變化判斷各組細胞皮下成瘤能力。
?、苡肳estern Blotting檢測各實驗組細胞周期相關蛋白cyclin E和p27kip1的表達。
結(jié)果:
?、俪晒嫿?4-3-3ε穩(wěn)定低表達的細胞
3、系。
?、贛TT比色法轉(zhuǎn)染組吸光度值明顯低于未轉(zhuǎn)染組(P<0.05);流式細胞儀細胞周期分析轉(zhuǎn)染組處于G1/G0期的細胞百分比高于未轉(zhuǎn)染組(P<0.05),處于S期的細胞百分比低于未轉(zhuǎn)染組(P<0.05);裸鼠皮下成瘤實驗轉(zhuǎn)染組瘤體體積增長明顯慢于未轉(zhuǎn)染組(P<0.05)。
?、踂esternBlotting結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組cyclin E蛋白表達下調(diào),顯著低于未轉(zhuǎn)染組(P<0.05),而p27kip1蛋白表達上調(diào),顯著高
4、于未轉(zhuǎn)染組(P<0.05)。
結(jié)論:
?、俪晒⒘擞胹hRNA進行RNA干擾的14-3-3ε穩(wěn)定低表達的SGC7901胃癌細胞株;
②通過下調(diào)SGC7901胃癌細胞中14-3-3ε蛋白的表達使胃癌細胞增殖抑制、細胞周期G1/S期阻滯及裸鼠皮下成瘤能力降低,14-3-3ε可望成為胃癌診斷的指標和靶向治療的靶點;
③下調(diào)SGC7901胃癌細胞14-3-3ε表達使cyclin E表達下調(diào),p27kip1
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