1、目的：本實驗通過無菌未滅活的豬血清腹腔注射的方法建立肝纖維化大鼠模型，觀察化濁解毒調(diào)肝方對肝纖維化大鼠血清中透明質(zhì)酸(HA)、Ⅲ型前膠原(PCⅢ)水平和病理形態(tài)學(xué)的影響；化濁解毒調(diào)肝方對肝纖維化大鼠肝組織轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-betal-1,TGF-βi)表達的影響；化濁解毒調(diào)肝方對肝纖維化大鼠肝組織Smad3蛋白表達的影響；從而探討化濁解毒調(diào)肝法治療本病的作用機制，為該法的臨床應(yīng)用提

2、供理論依據(jù)。
　　 方法：清潔級Wistar大鼠50只，雄性，體重200～220g。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后隨機分為正常對照組、模型對照組、秋水仙堿治療組（簡稱西藥治療組）、化濁解毒調(diào)肝方低劑量組(HZD)、化濁解毒調(diào)肝方高劑量組(HZG)，每組10只。各組均普通顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水和進食，分籠飼養(yǎng)于22±2℃，濕度70％±5％清潔級動物實驗室內(nèi)。除正常對照組外，其余40只均采用未滅活的豬血清腹腔注射，每次0.5ml/只，固定時間為周

3、一、周五上午9點，連續(xù)8周。造模成功后HZD組給予含1.5g/ml生藥水煎劑灌胃，HZG組給予含3.0g/ml生藥水煎劑灌胃；秋水仙堿組給予0.154g/kg·d灌胃，均至12周末。正常對照組與模型組給予0.9％生理鹽水(10ml/kg)，日1次灌胃。12周末采用腹主動脈取血，分離血清，用放射免疫分析法測定各組大鼠干預(yù)后血清中HA、PCⅢ水平。取大鼠肝組織，采用蘇木精-伊紅染色觀察肝組織病理形態(tài)學(xué)的變化。采用免疫組化檢測大鼠肝組織TGF

4、-β1蛋白的表達；采用免疫印跡(Western-immunoblotting)測定大鼠肝組織中Smad3蛋白的表達。數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（(?)±s）表示，運用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理。兩個樣本均數(shù)比較采用t檢驗，多個樣本均數(shù)比較行完全隨機設(shè)計單因素方差分析。
　　 結(jié)果：
　　 1一般情況：造模組1只大鼠死亡。正常對照組大鼠食欲佳，被毛光滑，精神狀態(tài)好，活潑好動，體重逐漸增加。模型對照組大鼠精神萎靡、皮毛雜亂，黯淡無

5、光澤、進食較正常組少、尿黃，有的大鼠鼻有出血，體重較前有所增加，但不如正常組增加顯著。西藥及中藥治療各組大鼠進食、營養(yǎng)、活動等尚可，體重逐漸增加，與正常組差別不顯著。
　　 2化濁解毒調(diào)肝方對肝纖維化大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)的影響
　　 肉眼觀察，正常組大鼠肝臟質(zhì)軟，略呈深紅色，新鮮，表面光滑，無任何斑點，突起，邊緣銳圓。模型組大鼠肝臟腫大明顯，質(zhì)地硬，顏色暗紅，表而粗糙不平，有的可見顆粒樣凸起，邊緣鈍。西藥及中藥治療組大鼠肝

6、臟腫大不明顯，質(zhì)較脆，表面較光滑，顏色略為暗紅，表面偶有細沙粒狀增生。光鏡下，正常組肝小葉排列整齊，肝細胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列，無變性壞死，纖維組織只在中央靜脈周圍、匯管區(qū)周圍有少量表達，含量極少。模型組肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝細胞變性、壞死伴中性粒細胞及淋巴細胞浸潤，纖維組織大量增生，個別動物可見假小葉形成。秋水仙堿組與中藥治療各組肝臟損傷程度均較模型組輕，但秋水仙堿組與中藥治療各組之間病理形態(tài)無明顯差別。
　　 3化濁解毒調(diào)肝

7、方對肝纖維化大鼠血清HA、PCⅢ水平的影響
　　 與正常對照組相比，模型組大鼠血清HA、PCⅢ水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。與模型對照組相比，12周末，各藥物干預(yù)組大鼠血清HA、PCⅢ水平下降，有顯著差異(P＜0.01)，秋水仙堿組、HZD組之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）：HZG組與秋水仙堿組比較HA、PCⅢ水平降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4化濁解毒調(diào)肝方對肝纖維化大鼠肝組織

8、TGF-β1蛋白表達的影響
　　 正常組大鼠肝組織見少許TGF-β1陽性表達細胞，表現(xiàn)為不均勻的棕黃色顆粒狀物。模型組大鼠肝組織中表達的陽性細胞比例顯著高于正常組，與正常對照組相比，模型組大鼠肝組織TGF-β1蛋白表達增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與模型對照組相比，各藥物干預(yù)組大鼠肝組織TGF-β1蛋白表達下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，且秋水仙堿組、HZD組之間TGF-β1蛋白表達無顯著性差異（P＞0.05）

9、；HZG組與秋水仙堿組比較TGF-β1蛋白表達量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 5化濁解毒調(diào)肝方對肝纖維化大鼠肝組織Smad3蛋白表達的影響
　　 與正常對照組相比，模型對照組大鼠肝組織Smad3蛋白的表達量明顯增強(P＜0.01)?；瘽峤舛菊{(diào)肝方各劑量組及秋水仙堿組與模型組相比Smad3蛋白的表達量均有下降，差異顯著(P＜0.01)，HZD組與秋水仙堿組Smad3蛋白的表達量無顯著性差異（P＞0.05）

10、，HZG與秋水仙堿組比較Smad3蛋白表達量降低，差異顯著(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1化濁解毒調(diào)肝方能夠改善肝纖維化大鼠的一般狀況，且能夠減輕肝細胞的損傷，減少膠原纖維的生成，從而改善肝組織病理。
　　 2化濁解毒調(diào)肝方能顯著降低大鼠血清HA、PCⅢ型膠原含量，減少細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的生成，進一步抑制肝纖維化的形成。
　　 3化濁解毒調(diào)肝方能顯著抑