1、將全血樣品收集在卡紙上，即干血點(diǎn)采樣(DBS)；將血漿樣品收集在卡之上，即干血漿采樣(DPS)。國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道：這兩種方法在血樣采集方面比傳統(tǒng)方法有一定的優(yōu)勢(shì)：需求較少的血量，可減少動(dòng)物使用，方便血樣采集、存儲(chǔ)運(yùn)輸，簡(jiǎn)化樣品前處理。到目前為止，DBS法與LC-MS/MS技術(shù)聯(lián)用在藥物小分子定量分析中已成為一個(gè)重要的方法，將在藥代動(dòng)力學(xué)研究中得到越來(lái)越多的應(yīng)用。但DBS、DPS方法學(xué)并不是十分成熟，對(duì)于DBS、DPS法和蛋白沉淀法綜合對(duì)比并

2、結(jié)合臨床藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)分析的研究極少。
　　 麥考酚酸(MPA)是一種免疫抑制劑，常用于預(yù)防同種腎移植病人的排斥反應(yīng)及治療難治性排斥反應(yīng)，降低自身免疫。
　　 本論文研究的目的是：通過(guò)在DBS和DPS實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)比不同的樣品處理方法，完成并總結(jié)影響DBS和DPS方法學(xué)的因素，盡可能成熟DBS和DPS方法學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，能為以后的BDS和DPS方法學(xué)設(shè)計(jì)提供較為可靠的數(shù)據(jù)支持。分別用DBS、DPS法和蛋白沉淀法處理MPA臨床實(shí)

3、驗(yàn)的血樣后，分析其藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，總結(jié)DBS和DPS法實(shí)際應(yīng)用意義。比較DBS、DPS法和蛋白沉淀法，總結(jié)其優(yōu)勢(shì)與不足。
　　 建立MPA的LC-MS/MS檢測(cè)方法。以吡咯列酮作為內(nèi)標(biāo)，用配有ESI離子源及Xcaliber1.2數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)的TSQHPLC-MS/MS分析，色譜柱采用EcosilC18柱，柱溫為30℃，流動(dòng)相為乙腈：甲醇：0.01mol·L-1甲酸水(0.1％甲酸)=45:30:25，流速為0.4mL·min-1

4、，MPA和比格列酮的保留時(shí)間分別為6.81min和7.33min，儀器運(yùn)行時(shí)間為8.6min(2min之前和8.4min之后切換)。質(zhì)譜檢測(cè)采用正離子MRM方式檢測(cè)，毛細(xì)管溫度為280℃，鞘氣壓力為40psi，輔助氣壓力為10psi，碰撞能26ev，選擇離子為MPAm/z338.2[M+NH4]+→m/z207.2，吡咯列酮m/z357.1[M+NH4]+→m/z134.1。
　　 對(duì)于一些可能影響DBS和DPS方法的一些因素如

5、：點(diǎn)卡體積、打孔位置、提取液的比例和提取方法等都做了分析比較。結(jié)果顯示：1.0μg·mL-1濃度的MPA10μL、15μL和20μL不同的點(diǎn)卡所測(cè)得的結(jié)果基本相同(P>0.05)，點(diǎn)卡體積對(duì)結(jié)果沒(méi)有顯著的影響，選擇20μL為點(diǎn)卡體積；邊緣打孔的響應(yīng)值比中心打孔的要高10％左右，但其精密度要差4％左右(邊緣打孔精密度為9％，中心打孔精密度為5％)，選擇中心打孔；單變量對(duì)比不同提取液分別為甲醇：水=25:75、甲醇：水=50:50、甲醇：水

6、=75:25提取后所得結(jié)果，所測(cè)得結(jié)果相近，精密度相似，甲醇：水=25:75回收率雖略高但提取液呈紅色，過(guò)固相萃取柱也不能濾去，同時(shí)對(duì)比了加入適量甲酸(含量為0.1％)和不含甲酸的提取液，結(jié)果為不加甲酸的提取率略高，所以提取液選為不含甲酸的甲醇：水=50:50；對(duì)比不同提取方法，超聲10min和30min、渦旋提取10min和30min所測(cè)得平均濃度相近，精密度相似，基于簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)，最后選擇超聲10min為提取方法。
　　 蛋白沉

7、淀法，MPA在0.05～50μg·mL-1的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系(r2=0.999)。批內(nèi)和批間精密度RSD均小于5％，準(zhǔn)確度分別在99.0～104.0％之間，最低定量限為0.05μg·mL-1，提取回收率在97.6～100％之間，基質(zhì)效應(yīng)在0.97～1.00之間，證明所建立方法靈敏、可靠、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可以滿(mǎn)足藥代動(dòng)力學(xué)研究要求。
　　 DBS方法學(xué)，MPA在0.05～50μg·mL-1的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系(r2=0.998)。

8、批內(nèi)和批間精密度RSD均小于7％，準(zhǔn)確度分別在96.0～113.0％之間，最低定量限為0.05μg·mL-1，提取回收率在58.8～61.2％之間，基質(zhì)效應(yīng)在1.02～1.06之間，證明所建立方法靈敏、可靠、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可以滿(mǎn)足藥代動(dòng)力學(xué)研究要求。
　　 DPS方法學(xué)，MPA在0.05～50μg·mL-1的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系(r2=0.998)。批內(nèi)和批間精密度RSD均小于8％，準(zhǔn)確度分別在94.0～105.096之間，最低定量

9、限為0.05μg·mL-1，提取回收率在55.3～64.9％之間，基質(zhì)效應(yīng)在0.85～1.04之間，證明所建立方法靈敏、可靠、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可以滿(mǎn)足藥代動(dòng)力學(xué)研究要求。
　　 FTA卡很適合DBS和DPS方法學(xué)的確定。
　　 根據(jù)臨床藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得出結(jié)論，DPS方法和蛋白沉淀法所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)基本相同，但DBS法與DPS法和蛋白沉淀法有較大的差距，可能因?yàn)镈BS法用全血點(diǎn)卡，由于血漿蛋白結(jié)合率的個(gè)體差異導(dǎo)致所測(cè)得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)