1、限食具有獨特的生物學(xué)效應(yīng)：①限制飲食可以延長最大壽命和平均壽命；②限食減輕或延緩老年病的發(fā)生；③限食延壽的核心作用是降低老化的速度，并非是單純的防??；④限食延壽是在多種物種中觀察到的普遍現(xiàn)象。揭示限食延壽的機制，從本質(zhì)上闡明其作用原理，是確保此項方法的合理應(yīng)用和健康發(fā)展的關(guān)鍵。多年的研究過程中，科學(xué)家們提出了多種限食效應(yīng)的假說，但都不能概括限食延緩衰老的作用機制。隨著基因組時代到來，限食研究也進入分子生物學(xué)時代?？茖W(xué)家們幾近達成這樣的一

2、個共識，即生物體的壽命是由基因決定的，因為通過對某些基因的修飾，一些生物體的壽命成倍增長。比較這些已取得的延緩衰老的大量研究成果我們發(fā)現(xiàn)，胰島素或胰島素樣生長因子(InstJlin/IGF)信號通路基因是生物體內(nèi)主要的抗衰老途徑，而限食的生物標(biāo)志就是血清胰島素水平顯著降低，胰島素敏感性顯著增加。為此我們推測胰島素信號通路相關(guān)基因可能是限食效應(yīng)的重要基礎(chǔ)。 目的：分別研究限食對小鼠胰島素信號通路相關(guān)基因、糖代謝等相關(guān)基因表達的影響

3、，分析差異表達基因的功能和相互聯(lián)系，探討限食生物學(xué)效應(yīng)的可能分子機制。 方法： ①.復(fù)制小鼠限食模型：24只2月齡C57BL/6N小鼠單籠飼養(yǎng)，適應(yīng)一周后，隨機分為2組，對照組(Ad libitum，AL組，自由攝食組，12只)和限食組(Dietaryrestriction，DR組，12只，進食對照組60％飼料)；限食3個半月后，禁食18小時，摘眼球取血，采用美國強生公司出品的One-TouchⅡ型血糖儀和血糖儀試紙測定

4、血糖水平，采用美國LINCO Researctl RI-13K放免試劑盒測定血清胰島素濃度。記錄體重、主要臟器重。 ②.采用美國SuperArray公司設(shè)計的Q Series Insulin SignalingPathway Gene Array基因芯片檢測小鼠附睪脂肪墊96個胰島素信號通路基因表達，采用SYBR Green 1熒光嵌合法在部分差異表達的基因中選出2個基因Akt3和Npy對雜交結(jié)果進行進一步驗證。 ③.采

5、用美國SuperArray公司設(shè)計的小鼠糖尿病基因芯片(Oligo GEArray MotJse Diabetes Microarray，OMM-023)檢測了肝臟中包含與糖代謝、糖尿病、胰島素抵抗等相關(guān)的114個基因，采用SYBR Green 1熒光嵌合法，檢測Akt2基因的表達以對雜交結(jié)果進行進一步驗證。 ④.采用Western blotting法檢測了限食對小鼠肝AKT2和附睪脂肪墊AKT3蛋白表達。 ⑤.采用雙夾

6、心抗體法(AKT磷酸化信號通路試劑盒) 檢測小鼠肝和附睪脂肪墊AKT(Ser<'473>和Thr<'308>)磷酸化水平。 結(jié)論： ①.限食模型復(fù)制是成功的。 ②.限食可影響小鼠附睪脂肪墊胰島素信號通路32.3％(31/96)基因的表達，遠遠超過目前國外相關(guān)報道較多的少數(shù)幾個胰島素信號通路基因。其中 PI3K-AKT3-GSK-3 β通路值得進一步關(guān)注，胰島素信號通路基因的表達與限食效應(yīng)可能存在密切聯(lián)系：

7、 ③.限食引起的以附睪脂肪墊為代表的體脂大大降低可能是限食小鼠胰島素敏感性增高的原因。 ④.限食可影響小鼠肝糖代謝、胰島素抗性和脂代謝等19.2％(22/114)相關(guān)基因的表達。其中限食對AKT2、胰島素降解酶(IDE)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、CAAT增強子結(jié)合蛋白δ(C/EBFδ)、腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)三種主要成分(AGT/ACE/ACE2)等基因表達的影響有待于進一步研究。 ⑤.由于限食可同時在轉(zhuǎn)錄水平和