1、弓形蟲?。═oxoplasmosis）是由專性細胞內(nèi)寄生的弓形蟲（Toxoplasma gondii）引起的呈世界范圍分布的機會致病性人獸共患寄生蟲病，WHO和FAO已將其列為值得全球關(guān)注的食源性寄生蟲病。它給畜牧業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失的同時，也威脅著人類（特別是艾滋病病人、接受癌癥治療的病人及器官移植患者等）的生命安全，對世界公共衛(wèi)生安全提出了嚴峻的挑戰(zhàn)。由于目前仍沒有安全、有效的藥物根治弓形蟲病，因此研制安全、有效的抗弓形蟲病疫苗對于

2、弓形蟲病的預(yù)防具有重要意義。
　　病毒載體一般不具有返強的風險，不僅可增強疫苗的活性，還能在適宜的細胞系中培養(yǎng)出表達目的外源基因蛋白的高滴度的重組病毒。在之前的研究中，我們課題組構(gòu)建表達弓形蟲 ROP18蛋白的真核表達載體作為核酸疫苗免疫小鼠，結(jié)果顯示此疫苗能夠延長RH株攻擊感染的小鼠的存活時間，但保護效力不太理想，因此，我們利用病毒載體代替真核表達載體，探尋重組病毒疫苗對小鼠是否具有更高效的保護效力。
　　本研究采用犬Ⅱ型

3、腺病毒表達系統(tǒng)，構(gòu)建了含有弓形蟲RH株ROP18基因的重組腺病毒質(zhì)粒（pPloy2-CAV-2-ΔE3-ROP18），將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入MDCK細胞進行重組病毒的包裝，發(fā)現(xiàn)細胞出現(xiàn)明顯的CPE病變，通過 IFA鑒定重組病毒確實能夠特異性表達外源蛋白，成功獲得了能夠表達弓形蟲 ROP18蛋白的復(fù)制型重組腺病毒（CAV-2-ROP18）。利用重組病毒對昆明小鼠進行肌肉注射接種，同時設(shè)置 CAV-2弱毒株陰性對照組、PBS陰性對照組和空白對照組

4、，測定各組小鼠體內(nèi)的免疫應(yīng)答指標，評估重組病毒疫苗對小鼠的保護效力。
　　實驗結(jié)果顯示，CAV-2-ROP18免疫組小鼠機體產(chǎn)生了有效的抗弓形蟲感染的體液免疫和細胞免疫反應(yīng)：特異性IgG和IgG1抗體水平明顯升高；脾淋巴細胞SI顯著升高；淋巴細胞分泌了大量的IFN-γ、IL-2和少量的IL-4；細胞內(nèi)的細胞因子 IFN-γ和TNF-α均上調(diào)；CD4+和CD8+T淋巴細胞發(fā)生活化，比率上升；顯著提高RH株感染小鼠的存活率（40％）；