1、目前紫杉醇已成為世界上公認(rèn)的廣譜、強(qiáng)活性、抗癌藥物。現(xiàn)今，人類獲得紫杉醇的方法大都停留在實(shí)驗(yàn)室階段，由于收率低和提取工藝上尚存在一些困難，還不具備商業(yè)應(yīng)用價(jià)值，所以國際市場上至今仍沿用十年前確立的紫杉醇原料藥兩大制備方法（即紫杉樹皮提取法和樹枝提取一半合成法）。尋找新的生物資源，保護(hù)生態(tài)環(huán)境已迫在眉睫。目前對(duì)從紅豆杉屬植物中提取分離得到的新紫杉烷類藥物的研究主要是尋找具有較低毒副作用、較高抗腫瘤選擇性及對(duì)多種腫瘤細(xì)胞，尤其是對(duì)有抗藥性的

2、人體腫瘤細(xì)胞有較高生物活性的紫杉烷類化合物。
　　 目的：本研究的目的就是將從東北紅豆杉的可再生資源部位——小枝和針葉中分離純化得到的紫杉烷類化合物進(jìn)行抗腫瘤細(xì)胞增殖活性的篩選，為開發(fā)新的抗腫瘤藥物提供理論依據(jù)。
　　 方法：1、應(yīng)用MTT比色法對(duì)從東北紅豆杉中選取的12種紫衫烷類化合物進(jìn)行腫瘤細(xì)胞增殖抑制作用篩選。2、機(jī)制研究：采用腫瘤細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)，以Taxol作為陽性對(duì)照，觀察Taxuspine F處理人腦神經(jīng)膠

3、質(zhì)瘤細(xì)胞24h后，再分別培養(yǎng)細(xì)胞1d、3d和5d，計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度，繪制細(xì)胞增殖曲線以進(jìn)行比較。3、通過電鏡技術(shù)觀察其形態(tài)學(xué)改變，初步探討了Taxuspine F抑制腫瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 1、Ⅰ型紫杉烷類化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響
　　 1.1具有I-a型結(jié)構(gòu)的紫杉烷類化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響
　　 用1μmol/L、10μmol/L和100μmol/L紫杉醇和順鉑處理后的HeLa細(xì)胞的

4、生存率分別為28％、22％、15％和81％、57％、34％，并呈現(xiàn)較好的劑量依賴關(guān)系。而100μmol/L化合物Decinnamoytaxinine E（1）和5α，9α，10β，13α-Tetrahydroxy-4（20），11-taxadiene（4）處理后的HeLa細(xì)胞，顯示了較弱的抑制活性；2-Deacetyldecinnamoyltaxinine E（2）和Taxuspine F（3）不顯示任何抑制活性。此外，化合物1和2對(duì)人

5、子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞、人卵巢透明癌細(xì)胞、人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞、人黑色素瘤細(xì)胞和人乳腺癌腦轉(zhuǎn)移細(xì)胞不顯示任何抑制活性；化合物3和4僅對(duì)人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞顯示較強(qiáng)的抑制活性，其IC50分別為8.43μmol/L和23.71μmol/L。
　　 1.2具有I-b型結(jié)構(gòu)的紫杉烷類化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響
　　 用100μmol/L紫杉醇和5α-DeacetylbaccatinⅠ（10）處理腫瘤細(xì)胞后，紫杉醇對(duì)各種腫瘤細(xì)胞均

6、顯示抑制活性，且與對(duì)照組相比均有顯著性差異，而化合物10均不顯示任何抑制活性。
　　 1.3具有I-c型結(jié)構(gòu)的紫杉烷類化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響
　　 分別用100μmol/L濃度的13-Aetyl-baccatinⅢ（5）、9-Dihydro-13-acetylbaccatinⅢ（6）、10-Deacetyl-13-acetylbaccatinⅢ（7）和10-Deacetyl-baccatinⅢ（8）處理HeLa細(xì)胞，

7、均顯示較強(qiáng)的抑制活性，其生存率分別為53.12％、49.38％、52.02％和44.17％；1μmol/L、10μmol/L和100μmol/L濃度的7-（β-xylosyl）Taxol（9）均對(duì)HeLa細(xì)胞顯示強(qiáng)的抑制活性，其生存率分別為54.35％、41.89％和19.67％，低于順鉑，并呈現(xiàn)較好的劑量依賴關(guān)系。此外，化合物8和9對(duì)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞、人卵巢透明癌細(xì)胞、人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞、人黑色素瘤細(xì)胞和人乳腺癌腦轉(zhuǎn)移細(xì)胞

8、的增殖不顯示任何抑制活性；化合物5和6僅對(duì)人卵巢透明癌細(xì)胞的增殖顯示較強(qiáng)的抑制活性，IC50分別為25.89μmol/L和20.38μmol/L；化合物7僅對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞的增殖顯示較強(qiáng)的抑制活性，IC50為53.98μmol/L。
　　 2、具有Ⅳ型結(jié)構(gòu)的紫杉烷類化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響
　　 用100μmol/L濃度的紫杉醇、14β-BenzoyloxybaccatinⅣ（11）和Taxuspine N（12）處理

9、各種腫瘤細(xì)胞后，紫杉醇對(duì)各種腫瘤細(xì)胞的增殖均顯示抑制活性，而化合物11對(duì)各種腫瘤細(xì)胞的增殖均不顯示任何抑制活性，化合物12僅對(duì)人卵巢透明癌細(xì)胞（HOC-21）和人肝癌細(xì)胞（HLE）的增殖顯示較強(qiáng)的抑制活性，其細(xì)胞生存率分別為54.86％和57.14％。
　　 3、紫杉烷類化合物Taxuspine F（3）對(duì)T-98細(xì)胞生長曲線的影響
　　 采用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)方法顯示，經(jīng)紫杉醇和紫杉烷類化合物Taxuspine F（3）的1

10、0μmol/L實(shí)驗(yàn)組處理的T-98細(xì)胞在1d，3d，5d后計(jì)數(shù)的活細(xì)胞數(shù)分別為1.4×105cells/mL、2.9×105cells/mL、4.0×105cells/mL和5.2×105cells/mL、13.5×105cells/mL、15.1×105cells/mL，與對(duì)照組相比均有非常顯著性差異（P<0.01）。
　　 4、對(duì)被試瘤株細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響
　　 T-98腫瘤細(xì)胞經(jīng)Taxuspine F（3）（10μ

11、mol/L）處理后發(fā)生超微結(jié)構(gòu)變化，通過透射電鏡觀察顯示如下：胞體縮小，胞質(zhì)濃縮，胞核明顯向外呈銳角狀突起、染色質(zhì)濃縮，密度增高，邊集于核膜下或呈新月體，核固縮，電子密度增高，核碎裂以及偶見凋亡小體形成等細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。對(duì)照組腫瘤細(xì)胞未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。
　　 結(jié)論：1 C4（20）為含氧三元環(huán)的紫杉烷類化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖不顯示任何抑制作用，而C4-C20位有環(huán)外雙鍵或C4（20）-C5四元氧環(huán)的紫杉烷類化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖

12、顯示較強(qiáng)的抑制作用。2 Taxuspine F（3）對(duì)人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖顯示強(qiáng)的抑制作用；7-（β-xylosyl）Taxol（9）對(duì)人子宮頸癌細(xì)胞顯示強(qiáng)的抑制作用；13-Aetyl-baccatinⅢ（5）和9-Dihydro-13-acetylbaccatinⅢ（6）對(duì)人卵巢透明癌細(xì)胞的增殖顯示較強(qiáng)的抑制作用；Taxuspine N（12）對(duì)人卵巢透明癌細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞的增殖顯示較強(qiáng)的抑制作用。3 Taxuspine F（3）