1、膿毒癥(sepsis)是一種創(chuàng)傷、感染等引起機(jī)體過(guò)激的炎癥反應(yīng)從而對(duì)人體產(chǎn)生嚴(yán)重危害的疾病，死亡率極高。近年來(lái)，隨著科學(xué)家對(duì)膿毒癥的深入研究，發(fā)現(xiàn)其病程變化中免疫系統(tǒng)的功能障礙是膿毒癥中的一個(gè)突出問(wèn)題。膿毒癥過(guò)程中，機(jī)體非特異免疫系統(tǒng)過(guò)度活化，同時(shí)特異性免疫系統(tǒng)功能障礙，出現(xiàn)以T細(xì)胞反應(yīng)性降低或無(wú)反應(yīng)狀態(tài)為特征的免疫抑制。免疫抑制主要表現(xiàn)在遲發(fā)超敏反應(yīng)喪失、病原清除能力下降、易發(fā)生繼發(fā)感染等。這其中淋巴細(xì)胞的凋亡、單核細(xì)胞功能異常是一個(gè)

2、重要的原因，但是其發(fā)生機(jī)制尚未清楚。為此，本實(shí)驗(yàn)旨在研究淋巴細(xì)胞凋亡及單核細(xì)胞功能異常的機(jī)制，找出其病理生理變化過(guò)程中的關(guān)鍵問(wèn)題，并尋求合理的治療靶點(diǎn)。
　　 PD-1(programmed death-1)是一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量為55kDa的免疫球蛋白超家族Ⅰ型跨膜糖蛋白，能夠與B7家族分子PD-L1和PD-L2結(jié)合。PD-1可表達(dá)于T細(xì)胞、B細(xì)胞、髓系細(xì)胞和胸腺細(xì)胞側(cè)，提示PD-1在免疫調(diào)節(jié)方面有著廣泛的作用。并且PD-1/PD

3、-L1途徑在慢性病毒感染、炎癥、腫瘤免疫、自身免疫性疾病等方面扮演著重要的角色，提示我們PD-1/PD-L1途徑可能有希望作為今后一個(gè)治療上述相關(guān)疾病的靶點(diǎn)。
　　 本實(shí)驗(yàn)旨在研究PD-1/PD-L1途徑對(duì)膿毒癥T淋巴細(xì)胞凋亡以及單核細(xì)胞功能的作用，為膿毒癥的治療探尋新的有效靶點(diǎn)。在本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)我們發(fā)現(xiàn)膿毒癥患者T淋巴細(xì)胞表面PD-1水平以及單核細(xì)胞表面PD-L1水平較正常人顯著升高，并且與病情嚴(yán)重程度有相關(guān)性，

4、病情好轉(zhuǎn)出院的患者的PD-1和PD-L1水平下降到比較低的水平，而病重死亡的患者PD-1和PD-L1水平卻上升到很高的水平。為了研究這條途徑對(duì)淋巴細(xì)胞以及單核細(xì)胞的作用，我們對(duì)PD-1/PD-L1途徑在體外進(jìn)行阻斷，研究T細(xì)胞凋亡以及單核細(xì)胞功能的變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示用抗PD-L1抗體阻斷PD-1/PD-L1途徑后能夠在TNF-α、TCR兩條誘導(dǎo)凋亡途徑中降低T淋巴細(xì)胞的凋亡率。同時(shí)，阻斷PD-1/PD-L1途徑后還能夠提高單核細(xì)胞的機(jī)能

5、，使細(xì)胞在LPS刺激后分泌細(xì)胞促炎因子的水平增加，抗炎因子的水平降低。
　　 隨后我們采用盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)致膿毒癥小鼠模型進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步驗(yàn)證了同樣的結(jié)果。阻斷了PD-1/PD-L1途徑后，改善了CLP小鼠外周血、脾、胸腺、肺細(xì)胞的凋亡情況，提高CLP小鼠血清中促炎因子的水平，降低了抗炎因子的水平，即對(duì)單核細(xì)胞的功能有所恢復(fù)。另外也提高了CLP小鼠的生存率。并且我們對(duì)治愈的CLP小鼠進(jìn)行了外周血PD-1和PD-L1表達(dá)