1、Graves?。℅D）是臨床甲狀腺機能亢進癥的最主要病因，約占全部甲亢的80～85％。目前很多關(guān)于GD的研究將焦點放在了調(diào)節(jié)性細胞中，調(diào)節(jié)性細胞在GD患者作用如何，能否通過增強調(diào)節(jié)性細胞的功能，來通過恢復(fù)Th1/Th2細胞功能平衡。達到治療的作用。這對于我們對更好的了解GD的發(fā)病及發(fā)展機制，以及以后更好的治療GD提供了一個良好的契機。本實驗著重介紹在機體免疫調(diào)節(jié)中起到重要作用的一組分子-CD1s分子。 CD1s分子是一種和MHC

2、1分子結(jié)構(gòu)類似的白細胞分化抗原，它可以遞呈機體內(nèi)的脂質(zhì)抗原，并加工及遞呈這些脂質(zhì)抗原分子給CD1限制性淋巴細胞，包括自然殺傷T細胞（NKT）等，從而誘發(fā)機體一系列的免疫反應(yīng)，在抗感染免疫、自身免疫病等多個方面發(fā)揮作用。CD1分子目前已知的基因型主要由5種：CD1a、b、c、d、e：其編碼的蛋白產(chǎn)物目前已知的主要有四種：CD1a、CD1b、CD1c、CD1d。根據(jù)這四種蛋白分子的α1及α2氨基酸序列和分布特點將這四種分子分為兩類。其中Ⅰ類

3、分子主要包括CD1a、CD1b、CD1c；Ⅱ類分子指的是CD1d。這四種亞型廣泛的存在與大多數(shù)的哺乳動物體內(nèi)，比如羊、兔、幾內(nèi)亞豬和恒河短尾猴，但在嚙齒類動物體內(nèi)，比如小鼠或大鼠體內(nèi)，只存在CD1d基因，其編碼的蛋白產(chǎn)物也只有CD1d分子。 Ⅰ類CD1分子主要表達在胸腺皮質(zhì)的成熟細胞和某些抗原遞呈細胞。其中人胸腺細胞中大約有70％左右的細胞CD1表達陽性，且通常是CD1a、CD1b、CD1c三種同時表達在1個胸腺細胞。此外，在全

4、身大多數(shù)的樹突狀細胞（DC）表面，通常也可發(fā)現(xiàn)有CD1c分子的表達。而CD1b分子則可以在胃腸道相關(guān)的淋巴組織的樹突狀細胞表面表達，CD1C還在某些亞群的B細胞表達。同時，Ⅱ類分子則主要表達與淋巴組織外的細胞如胃腸上皮細胞和造血細胞中。在小鼠體內(nèi)的CD1d分子則主要分布在胃、小腸、結(jié)腸上皮細胞及胸腺、脾、淋巴結(jié)內(nèi)的細胞等。此外，在小鼠的肝細胞中也有高水平的轉(zhuǎn)錄。CD1分子的表達受多種因素的影響，體外試驗提示IL-4、GM-CSF等可以通

5、過刺激單核細胞從而使其表面的CD1a、CD1b、CD1c的表達水平明顯增高，IFN-γ則可增加腸上皮細胞的CD1d表達的升高。 CD1分子識別的脂質(zhì)抗原擁有一個共同的特點：它們都有一個親水的帽狀結(jié)構(gòu)和一個分支狀或兩條長烷基烴組成的疏水尾部結(jié)構(gòu)。其中，親水的帽狀結(jié)構(gòu)為糖?；字＜〈迹℅PI）的成員，其頭端為一個異多糖的親水復(fù)合物，疏水端含有磷脂酰肌醇；疏水尾是脂質(zhì)抗原與CD1分子結(jié)合的部位，其親水的碳水化合物為TCR識別位點。C

6、D1s所識別的這些脂質(zhì)抗原可被αβ-T細胞受體表達細胞系所識別，刺激各種表型T細胞如CD8+細胞毒性T細胞、CD4-CD8-T細胞、γ/δT細胞等，其中，Ⅱ類CD1分子CD1d則能特異性識別皮摩爾濃度級的一種海洋海綿衍生脂質(zhì)物-α半乳糖神經(jīng)酰胺（α-GalCer），激活自然殺傷T細胞（NKT）[4]。 鑒于CD1s的結(jié)構(gòu)特點、可以遞呈脂質(zhì)抗原等特點，目前對于CD1s在抗感染免疫、抗腫瘤免疫及自身免疫性疾病的發(fā)生中發(fā)揮的作用也正逐

7、漸引起人們的重視。在自身免疫性糖尿病及系統(tǒng)性紅斑狼瘡等多種自身免疫性疾病中，CD1分子均扮演著重要角色。在自身免疫性糖尿病嚙齒類動物模型中，CD1d陽性表達細胞是起到保護并延遲疾病發(fā)展的作用；而在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中，它則和疾病的活動有關(guān)，伴隨疾病活性的增強，CD1s陽性表達細胞數(shù)目明顯升高[3]。此外，在自身免疫性甲狀腺疾病中，CarmeRM對5例GD患者的和3例橋本氏甲狀腺炎患者的甲狀腺組織進行免疫熒光及免疫組化分析后發(fā)現(xiàn)，在GD患者的

8、甲狀腺組織中，有大量的CD1s陽性表達淋巴細胞和樹突狀細胞存在，提示CD1陽性表達細胞在GD的發(fā)病機制及病情進展中可能發(fā)揮著重要的作用。 為此本試驗主要研究CD1s在GD患者（包括未治療組和藥物治療組，其中后者又包括甲狀腺功能正常組和甲狀腺功能亢進組）外周血中的表達，了解在GD患者外周血的淋巴及單核細胞中CD1s陽性細胞數(shù)目的表達情況，初步探討CD1s陽性細胞的表達和GD發(fā)病及發(fā)展之間的聯(lián)系。 目的： 通過比較整

9、個GD患者組和正常對照組、未治療GD組與正常對照組、GD治療組與未治療GD組等組間外周血CD1s陽性細胞表達數(shù)，了解CD1s陽性細胞在GD患者外周血單核細胞及淋巴細胞中的表達，從而初步探討CD1s與GD發(fā)病中可能起到的作用。 方法： 實驗組對象來源于南京軍區(qū)南京總醫(yī)院2008年12月-2009年2月門診就診的共44例Graves病患者（甲狀腺功能各項指標(biāo)正常范圍采用南京軍區(qū)南京總醫(yī)院微量放射免疫法測定標(biāo)準(zhǔn)：FT33.8～

10、6.0pmol/L；FT47.9～7.2pmol/L；TSH0.3～5.6mIU/L）。其中男性16例，女性28例，年齡19.53歲；并取18例正常人為對照組，其中男性7例，女性11例，年齡20-35歲。其中GD患者組中還包括初發(fā)Graves?。ㄎ词褂盟幬镏委煟┗颊吖?3例，其中男性5例，女性8例，年齡在19-53歲之間；藥物治療組患者31人，男性11人，女性20人，年齡20-61歲之間；其中甲狀腺功能正常組17人，其中男性5例，女性1

11、2例，年齡在20-59歲之間，甲狀腺功能亢進組14人，其中男性7人，女性共7人，年齡在19-63歲之間。取5-10mlGD患者及正常對照組外周靜脈全血（肱靜脈），采用流式細胞儀分析其中淋巴細胞及單核細胞中CD1s陽性表達細胞的百分?jǐn)?shù)，兩組間CD1s陽性細胞百分?jǐn)?shù)的比較采用兩獨立樣本間非參數(shù)秩和檢驗，相關(guān)分析采用Spearman分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： ①GD患者外周靜脈血的單核及淋巴細胞中，CD1a

12、、CD1b表達陽性細胞百分?jǐn)?shù)較正常對照組顯著升高，兩者間分布有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05），CD1c、CD1d表達陽性細胞百分?jǐn)?shù)較正常對照組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。 ②CD1s陽性表達細胞百分?jǐn)?shù)在性別間分布無明顯差異（P>0.05）。CD1s陽性表達細胞百分?jǐn)?shù)與GD患者病程行相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，兩者間無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。年齡與CD1s陽性表達細胞百分?jǐn)?shù)間行相關(guān)分析，兩者間無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。 ③未用

13、抗甲狀腺藥物的GD患者和正常對照組比較，CD1a、CD1b陽性表達細胞百分?jǐn)?shù)均顯著升高，兩者間分布均有統(tǒng)計學(xué)差異（圖5，CD1a+細胞百分?jǐn)?shù)比較：P<0.01；CD1b+細胞百分?jǐn)?shù)比較：P<0.05）；CD1c與CD1d陽性表達細胞百分?jǐn)?shù)在兩組間分布無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。 ④未用抗甲狀腺藥物治療組與使用抗甲狀腺藥物治療組間比較，CD1a、CD1b及CD1d陽性表達細胞百分?jǐn)?shù)的分布均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；而未用抗甲

14、狀腺藥物治療組CD1c陽性表達細胞百分?jǐn)?shù)顯著升高，兩者間分布有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。在使用抗甲狀腺藥物治療患者中。甲狀腺功能指標(biāo)正常組和甲狀腺功能亢進組間各CD1s陽性表達細胞百分?jǐn)?shù)間無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。 ⑤使用抗甲狀腺藥物組中，甲狀腺功能指標(biāo)正常的患者與正常對照組比較，CD1s陽性表達細胞百分?jǐn)?shù)在分布上無統(tǒng)計學(xué)差異（圖6，P>0.05）。 結(jié)論： GD患者較正常對照組相比，部分CD1s水平顯著升

15、高，提示CD1s可能在GD的發(fā)病中發(fā)揮一定的作用；在未治療的GD患者中，相較于正常對照組，CD1a、CD1b水平顯著升高，同時，由于樣本量的關(guān)系，雖然CD1c在兩組間P=0.060，但可能隨著樣本量的增加，兩者間顯著性差異可能存在。在初發(fā)的GD患者中，相較于藥物治療組，CD1s間除CD1c外均無顯著性差異，但藥物治療組間相比與初發(fā)的GD患者，其CD1s的表達均稱下降趨勢。這一方面提示隨著藥物干預(yù)及甲狀腺激素水平的趨于正常，患者外周血中C

16、D1s的表達也會隨之下降，這也可能是整體的GD患者與正常對照組比較只有CD1a有顯著性差異的原因。此外，本研究發(fā)現(xiàn)GD患者經(jīng)過藥物治療后，甲狀腺機能正常組和正常對照組間比較兩者是沒有顯著性差異的，這也從另一方面證實了上述觀點。此外CD1s的表達和性別、年齡以及GD患者病程間無顯著相關(guān)。 總結(jié): 本文采用流式細胞儀的方法檢測GD患者（包括未使用藥物治療組、藥物治療組，后者包括甲狀腺功能恢復(fù)正常組和甲狀腺機能亢進組）和正常對

17、照組外周血中淋巴細胞和單核細胞CD1s（包括CD1a、CD1b、CD1c、CD1d）陽性表達細胞百分?jǐn)?shù)，來比較GD患者與正常對照組、未使用藥物GD組和正常對照組、使用藥物GD組和未使用藥物治療GD組、甲狀腺功能恢復(fù)正常組和正常對照組間的CD1s陽性細胞的表達水平。發(fā)現(xiàn)GD患者中，外周血淋巴細胞和單核細胞中CD1a、CD1b陽性表達細胞水平較正常對照組顯著升高，在未使用藥物治療組中，CD1a、CD1b陽性表達細胞水平同樣較正常對照組顯著升