1、目的：采用抑制性消減雜交技術構建大鼠視覺可塑性相關基因的cDNA消減文庫，篩選與視覺可塑性關鍵期終止相關的基因及與視覺可塑性相關的基因，探討視覺可塑性及其關鍵期終止的分子機制。 方法：本研究主要分為四個部分，各部分的具體研究方法如下：1、自行設計并制作專用大鼠暗飼養(yǎng)箱，建立暗飼養(yǎng)動物模型及暗飼養(yǎng)后予光照刺激動物模型。2、采用暗飼養(yǎng)動物模型(D67)及暗飼養(yǎng)后予光照刺激動物模型(D60+L7)，應用抑制性消減雜交技術構建大鼠視皮質(zhì)

2、與視覺可塑性關鍵期終止相關基因的cDNA消減文庫。并通過PCR篩選、反向Northern雜交、測序及同源性檢索對差異表達基因進行分析，篩選視覺可塑性關鍵期終止相關基因。3、應用抑制性消減雜交技術構建幼年(P28)和成年(P60)大鼠視皮質(zhì)差異表達基因的cDNA消減文庫。并通過PCR篩選、反向Northern雜交、測序及同源性檢索對差異表達基因進行分析，篩選視覺可塑性相關基因。4、采用半定量RT-PCR技術檢測部分篩選到的基因在不同組大鼠

3、視皮質(zhì)中表達情況，進一步驗證應用抑制性消減雜交技術篩選到的差異表達基因的真實性。 結果：1、自行設計并成功制作了能滿足實驗要求的專用大鼠暗飼養(yǎng)箱，成功建立了暗飼養(yǎng)動物模型及暗飼養(yǎng)后予光照刺激動物模型。2、成功構建了大鼠視皮質(zhì)與視覺可塑性關鍵期終止相關基因的cDNA消減文庫，經(jīng)篩選，得到14個在D60+L7大鼠視皮質(zhì)中上調(diào)表達基因的片段。其中13個為已知基因，一個為新基因片斷。發(fā)現(xiàn)鋅指蛋白9、烯醇酶-1、熱休克蛋白8、脂肪細胞補體

4、相關蛋白、肽基脯氨酸異構酶A、非神經(jīng)元烯醇酶及ftp-3基因參與了視覺可塑性關鍵期的終止，同時，也篩選到既往有文獻報道其功能與可塑性相關的β-微管蛋白基因、髓磷脂堿蛋白基因、親環(huán)素基因參與了視覺可塑性關鍵期的終止。3、成功構建了幼年和成年大鼠視皮質(zhì)差異表達基因的cDNA消減文庫，經(jīng)過篩選，最后確定了11個基因在視覺可塑性關鍵期內(nèi)的大鼠(P28)視皮質(zhì)中上調(diào)表達，4個基因在視覺可塑性關鍵期終止后的大鼠(P60)視皮質(zhì)中上調(diào)表達。發(fā)現(xiàn)硬脂酰

5、基.輔酶A去飽和酶2基因、α血紅蛋白基因、谷氨酸-脯氨酸二肽重復蛋白基因、mDi4、不均一核糖核酸核蛋白C1/C2基因、strainBN/SsNHsdMCWmitochondrion參與了視覺可塑性過程，為視覺可塑性相關基因；而熱休克蛋白8基因、strainF344xBNF1mitochondrion、BHE/CdbtRNA-Lysgene、線粒體基因參與了成年大鼠視覺可塑性關鍵期的終止。同時，也篩選到既往有文獻報道的其功能與視覺可塑性

6、相關的基因，如：蛋白脂質(zhì)蛋白質(zhì)基因，調(diào)鈣蛋白2基因，細胞色素b基因等在幼年大鼠視覺可塑性高峰期視皮質(zhì)中高表達。4、應用半定量RT-PCR技術發(fā)現(xiàn)了Hsp8mRNA在P60組視皮質(zhì)中表達顯著高于P28組，PlpmRNA在P28組視皮質(zhì)中表達顯著高于P60組，MbpmRNA在D60+L7組視皮質(zhì)中表達顯著高于D67組，證實Hsp8、Mbp基因為視覺可塑性關鍵期終止基因，而Plp基因為視覺可塑性基因，同時也進一步驗證了所構建的cDNA消減文庫

7、的可靠性。 結論：通過大鼠視皮質(zhì)視覺可塑性關鍵期終止相關基因的cDNA消減文庫及大鼠視皮質(zhì)視覺可塑性相關基因的cDNA消減文庫的建立，為進一步闡明視覺可塑性關鍵期及其終止的分子機制提供了重要的基礎。初步篩選出一批視覺可塑性關鍵期終止相關基因及視覺可塑性相關基因，對這些基因的進一步篩選及驗證，將有助于發(fā)現(xiàn)決定視覺可塑性關鍵期終止及視覺可塑性的關鍵基因，為下一步采用基因治療手段對視覺可塑性關鍵期進行調(diào)控提供可能，從而打破弱視治療的時