1、香蕉枯萎病是由尖孢鐮刀菌古巴?；停‵usarium oxysporumf. sp.cubense）引起的維管束系統(tǒng)性病害，對香蕉生產造成毀滅性的破壞，引起了巨大的經濟損失。香蕉枯萎病菌4號小種（Foc4）幾乎能感染所有的香蕉品種，為害嚴重。目前，尚無有效的方法防治香蕉枯萎病。利用拮抗細菌進行生物防治的研究，近年來引起人們的關注。本研究室前期分離的枯草芽孢桿菌菌株G-7（Bacillus subtilissubsp.subtilisG-

2、7）能有效抑制Foc4的菌絲生長和孢子萌發(fā)，具有較高的生防潛力。本研究試圖從拮抗基因的克隆和表達方面，為香蕉枯萎病的防治提供理論參考和生防材料。
　　枯草芽孢桿菌與病原真菌作用時，會分泌脂肽類抗生素（Lipopeptide antibiotic），其中依枯草菌素A（IturinA）能干擾病原真菌細胞質膜功能導致細胞死亡。本研究分析了枯草芽孢桿菌G-7對Foc4抑菌活性，對iturinA合成相關基因lpa-14、ituD-1進行了克

3、隆和序列分析，并研究lpa-14、ituD-1在菌株G-7和Foc4拮抗后的表達情況。
　　在菌株G-7與Foc4平板對峙培養(yǎng)中，菌株G-7對Foc4的抑菌帶寬度達到5.90±0.10（mm），抑制率達到61.24±0.39（％）。溫室防效試驗結果表明：巴西蕉（Musa AAA）蕉苗經浸根接種菌株G-7培養(yǎng)液后，再植回含有Foc4孢子液土壤的盆中，30 d后觀察結果，陽性對照蕉苗表現(xiàn)出典型的香蕉枯萎病癥狀，而經過菌株G-7培養(yǎng)液處

4、理的巴西蕉苗發(fā)病情況明顯低于對照，顯示了良好的苗期活體抑菌效果。說明G-7菌株對Foc4有明顯的拮抗效果。
　　通過生長速率法對菌株G-7的發(fā)酵液、菌體懸浮液和培養(yǎng)濾液處理下Foc4菌絲的抑制率研究發(fā)現(xiàn)，菌株G-7能夠抑制Foc4的菌絲體生長。菌株G-7的發(fā)酵液、菌體懸浮液和培養(yǎng)濾液對Foc4菌絲體的抑制率分別為69.15±0.49（%），59.54±0.13（%）和31.83±0.08（%），均顯著高于對照組（P<0.05）。通

5、過孢子萌發(fā)法，對菌株G-7發(fā)酵液、菌體懸浮液和培養(yǎng)濾液處理下Foc4孢子萌發(fā)研究發(fā)現(xiàn)，3種處理液對Foc4孢子的萌發(fā)具有明顯的抑制作用，菌株G-7發(fā)酵液、菌體懸浮液和培養(yǎng)濾液處理下的Foc4孢子萌發(fā)率分別為23.28±0.10（%），44.42±3.82（%）和32.01±0.17（%），顯著低于對照組（P<0.05）。
　　克隆了菌株G-72個與脂肽類抗生素iturinA合成相關的基因ituD-1和lpa-14。測序得出，itu

6、D-1和lpa-14的DNA分別為1202 bp和675 bp。通過NCBI相似性分析發(fā)現(xiàn)，lpa-14編碼蛋白與Bacillus amyloliquefaciens（WP_060657811.1）中的磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶（PPTase）相似性為99%，且蛋白功能域分析發(fā)現(xiàn)lpa-14編碼蛋白屬于ACPS家族中的Sfp型蛋白；ituD-1編碼蛋白與Bacillus amyloliquefaciens（CBI43040.1）的丙二酰單