1、結(jié)直腸癌是胃腸道常見的惡性腫瘤之一。盡管其發(fā)病機(jī)理和關(guān)鍵因素研究有了很大的進(jìn)展，但是，與其他實體瘤一樣，仍有許多領(lǐng)域有待深入研究。甲基鳥嘌呤．DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(06-methylguanine-DNA methyltransferase，MGMT)是一種普遍存在的DNA修復(fù)酶，具有保護(hù)染色體免受烷化劑的致突變、致癌和細(xì)胞毒作用的損傷，MGMT基因的高甲基化和表達(dá)缺失可能參與人類多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展[1-2]。胸苷酸合成酶(thymidyl

2、ate synthase，TS)是dTMP合成過程中的限速酶，在細(xì)胞周期和增殖中發(fā)揮重要作用[3]。國內(nèi)外最新的研究表明，結(jié)直腸癌組織中MGMT和TS的表達(dá)水平與腫瘤對抗癌藥物5-FU的化療敏感性以及患者的預(yù)后關(guān)系密切[4-5]。為此，本文應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法分析結(jié)直腸癌、高級別上皮內(nèi)瘤變、低級別上皮內(nèi)瘤變和癌旁結(jié)腸黏膜的MGMT和TS的蛋白表達(dá)水平以及與結(jié)直腸癌的臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，以探討MGMT和TS蛋白表達(dá)在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展和

3、防治策略上的應(yīng)用價值。 一，材料與方法 收集2004-2006年浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院收治的78例原發(fā)性結(jié)直腸腺癌根治術(shù)標(biāo)本，26例正常黏膜、13例低級別上皮內(nèi)瘤變和11例高級別上皮內(nèi)瘤變組織蠟塊標(biāo)本。其中結(jié)直腸癌患者男性23例，女性55例，年齡范圍29-94歲，平均年齡61.58歲。78例結(jié)直腸癌中TNM Ⅰ期2例、Ⅱ期26例、ⅢI期45例和Ⅳ期5例。根據(jù)WHO腫瘤分類分級標(biāo)準(zhǔn)，高分化腺癌13例，中分化腺癌37例，

4、低分化腺癌28例。 免疫組織化學(xué)采用EnvisionTM鼠/兔-HRP廣譜檢測系統(tǒng)，檢測系統(tǒng)試劑盒和TS單克隆抗體(TS106)購自Dako公司，TS工作濃度為1：50，MGMT單克隆抗體(MT23.2即用型)購自上海長島試劑有限公司。每張切片厚4um，二甲苯脫蠟、梯度酒精水化，置于3％H2O2內(nèi)5分鐘滅活內(nèi)源性過氧化物酶?？乖迯?fù)后，自然冷卻20分鐘，滴加一抗，一抗常溫下孵育兩小時，PBS沖洗，2分鐘×3次；滴加二抗-HRP多

5、聚體，37℃溫箱內(nèi)孵育20分鐘，PBS沖洗2分鐘×3次；DAB顯色，蒸餾水沖洗、蘇木素復(fù)染，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹脂封固。用已知陽性的結(jié)腸腺癌組織作為陽性對照。 MGMT在細(xì)胞核或/和細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色為陽性著色，TS在胞漿或/和胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。在腫瘤組織染色的典型區(qū)域隨機(jī)觀察5個高倍視野，計算陽性細(xì)胞的比率。無細(xì)胞著色為陰性(一)，陽性細(xì)胞<10％為(+)，陽性細(xì)胞在109％-50％為(++)，陽性細(xì)胞>50％為

6、(+++)。 采用統(tǒng)計學(xué)軟件包SPSS11.5進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，不同組間結(jié)果采用X2檢驗。 二，結(jié)果 MGMT蛋白在正常黏膜、低級別和高級別上皮內(nèi)瘤變中陽性表達(dá)著色在細(xì)胞核(圖1，圖2)，而在結(jié)直腸癌中陽性表達(dá)著色在細(xì)胞核和細(xì)胞漿(圖3)。正常黏膜陽性率為26.9％(7/26)，低級別上皮內(nèi)瘤變和高級別上皮內(nèi)瘤變則分別為54.5％和53.8％，而在結(jié)直腸癌陽性率為62.8％。組間差異具有統(tǒng)計學(xué)顯著意義(P<0.01

7、)。 TS蛋白在正常黏膜、低級別上皮內(nèi)瘤變和高級別上皮內(nèi)瘤變中陽性著色在細(xì)胞漿(圖4，圖5)，陽性表達(dá)率分別為23.1％、38.5％、36.4％。TS在結(jié)直腸癌中陽性著色在細(xì)胞漿和細(xì)胞核(圖6)，陽性表達(dá)率為61.5％，組間差異具有統(tǒng)計學(xué)顯著意義(p<0.01)。 MGMT蛋白表達(dá)與年齡、腫瘤部位、腫塊大小、大體類型、組織學(xué)類型、浸潤深度和TNM分期等無關(guān)(p>0.05)；而與患者的性別(P<0.01.)和組織學(xué)分級(P<0.0

8、1)相關(guān)。 Ts蛋白表達(dá)與患者的年齡(p<0.05)和性別(p<0.05)有相關(guān)性，而與腫瘤部位、腫塊大小、大體類型、組織學(xué)類型、組織學(xué)分級、浸潤深度和TNM分期均無關(guān)(p>0.05)。 在78例結(jié)直腸癌中，MGMT和TS蛋白同時表達(dá)陽性的病例為35例，占44.9％．同時表一達(dá)陰性的16例占20.5％，其余27例則呈MGMTJ和TS表達(dá)的不一致性，占34.6％。組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 三，結(jié)論

9、 1、MGMT蛋白表達(dá)異?？砂l(fā)生在結(jié)直腸癌的全過程，從上皮內(nèi)瘤變到進(jìn)展期腺癌。檢測結(jié)直腸腫瘤組織中的MGMT蛋白表達(dá)水平，不但有助于發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌癌前易感病變，而且對結(jié)直腸癌的診斷和分化程度判斷也具有重要的參考價值。 2、TS蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)明顯高于正常結(jié)腸黏膜組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)顯著性意義(p<0.05)。說明TS在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮著重要的作用。 3、在結(jié)直腸癌中，Ts和MGMT的表達(dá)呈現(xiàn)多種表型，