1、目的：研究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)性凋亡是否參與了大鼠低氧性肺動(dòng)脈高壓的病理過程,并探討紅花防治低氧性肺動(dòng)脈高壓的作用是否與調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)性凋亡有關(guān). 方法：(1)慢性低氧高二氧化碳性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型建立:清潔級(jí)標(biāo)準(zhǔn)雄性SD大鼠33只(體重200～280g),隨機(jī)分成3組(n=11),即對(duì)照組、低氧組和紅花組.將后兩組大鼠放入常壓低氧高二氧化碳艙內(nèi)(艙內(nèi)氧氣濃度維持在9﹪～11﹪,二氧化碳濃度維持在5﹪～6﹪),每天8小時(shí),每周6天

2、,連續(xù)4周.紅花組于每日進(jìn)艙前半小時(shí)腹腔注射紅花注射液(2ml/kg體重),低氧組和對(duì)照組大鼠腹腔注射等量生理鹽水.四周后,用戊巴比妥鈉(35mg/kg體重)腹腔注射麻醉,右心導(dǎo)管法測(cè)量平均肺動(dòng)脈壓(mPAP),頸總動(dòng)脈插管測(cè)量平均頸動(dòng)脈壓(mCAP),分別稱取右心室游離壁(RV)和左心室加室間隔(LV+s)重量.以mPAP、RV/(LV+S)和肺細(xì)小動(dòng)脈管壁面積/管總面積(WA/TA)、管腔面積/管總面積(CA/TA)及肺細(xì)小動(dòng)脈中膜

3、厚度(PAMT)作為判斷模型建立成功的指標(biāo).(2)Hoechst染色檢測(cè)肺組織凋亡細(xì)胞.(3)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)肺組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異的凋亡酶caspase12、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶蛋白GRP78和GRP94的mRNA水平.(4)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)肺組織及肺血管GRP94蛋白的表達(dá). 結(jié)果：(1) 與對(duì)照組相比,低氧組的mPAP高50.50﹪(P<0.01),RV/(LV+S)高37.31﹪(P<0.01),而

4、mCAP兩組間無顯著性差異.(2)Hoechst染色結(jié)果分析顯示,肺組織凋亡細(xì)胞核低氧組明顯多于對(duì)照組(P<0.01).(3)與對(duì)照組相比,低氧組caspase12 mRNA高144.40﹪(P<0.05),GRP78 mRNA高52.86﹪(P<0.05),但GRP94 mRNA低50.97﹪(P<0.05).(4) 紅花組的mPAP和RV/(LV+S)分別比低氧組低19.79﹪和15.60﹪(P均<0.01),但仍比對(duì)照組高20.5

5、8﹪和15.89﹪(P均<0.05).mCAP三組間無顯著性差異.(5)肺組織與肺血管凋亡細(xì)胞核定量分析顯示紅花組肺組織凋亡細(xì)胞核明顯多于低氧組(P<0.01).(6)紅花組的caspase12 mRNA較低氧組高81.01﹪(P<0.01),GRP78 mRNA與低氧組無顯著性差異(P>0.05),紅花組的GRP94 mRNA較低氧組高169.44﹪(P<0.01). 結(jié)論： (1)慢性低氧高二氧化碳性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺

6、組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異的凋亡酶caspase-12和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶蛋白GRP78基因表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,GRP94基因表達(dá)下調(diào)而蛋白表達(dá)升高.提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)性細(xì)胞凋亡可能參與了慢性低氧高二氧化碳性肺動(dòng)脈高壓與肺血管改建的病理過程. (2) 紅花組肺組織凋亡細(xì)胞率明顯比低氧組高,肺血管凋亡細(xì)胞主要存在于PASMCs.提示紅花注射液降低肺動(dòng)脈高壓與改善肺血管重建的作用,可能與紅花促進(jìn)PASMCs的凋亡、調(diào)節(jié)PASMCs增殖/凋亡失衡有