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文檔簡介
1、本課題從人類肝臟組織中克隆出抗凋亡基因bcl-xL,構(gòu)建出滴度較高的含bcl-xL基因的重組復(fù)制缺陷型腺病毒,觀察它對體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞的抗凋亡作用并將其應(yīng)用于大鼠急性心肌梗死的動物模型,評價它對大鼠急性缺血心肌的保護(hù)作用。 本文根據(jù)多克隆位點選用XhoⅠ和SalⅠ雙酶切pTargeTTM-bcl-xL和內(nèi)含GFP的穿梭質(zhì)粒pAdTrack-CMV,將bcl-xL亞克隆至pAdTrack-CMV上,將陽性克隆用XhoⅠ和SalⅠ雙酶切
2、鑒定,得到pAdTrack-bcl-xL轉(zhuǎn)移質(zhì)粒?! ”疚慕⑿募〖?xì)胞體外缺氧模型,觀察重組bcl-xL腺病毒對缺氧心肌細(xì)胞的抗凋亡能力,評價它對體外缺氧心肌細(xì)胞的保護(hù)作用和可能機(jī)制?! ”疚牟捎迷思?xì)胞內(nèi)同源重組法快速高效地獲得了含目的基因bcl-xL的復(fù)制缺陷型重組腺病毒,在體外心肌細(xì)胞缺氧損傷模型上,腺病毒載體介導(dǎo)外源性bcl-xL基因轉(zhuǎn)染通過抑制線粒體釋放Cyt-C而阻斷線粒體介導(dǎo)的凋亡通路,能夠有效抑制缺氧心肌細(xì)胞凋亡。
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