1、第一部分：攜帶肝細胞生長因子的腺病毒在骨髓間充質(zhì)干細胞細胞的表達。 目的：將帶有肝細胞生長因子(HGF)及綠色熒光蛋白(GFP)基因的腺病毒載體，感染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)，觀察其感染率及HGF的表達。 方法：將構建好的攜帶HGF基因的腺病毒載體(Ad-HGF)和攜帶GFP基因的腺病毒載體(Ad-GFP)進行體外擴增、病毒滴度測定；貼壁細胞分離法和密度梯度離心法相結合體外分離、純化大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞，并通過流

2、式細胞儀檢測細胞表面抗原CD11b/c、CD34、CD44、CD90和CD29；將帶有GFP的腺病毒載體感染MSCs，免疫熒光顯微鏡測定含HGF基因的重組腺病毒(Ad-HGF)對MSCs感染率；ELISA和RT-PCR檢測HGF在MSCs中的表達。 結果：病毒擴增后噬斑試驗測定Ad-GFP的病毒滴度為8.3×1010 pfu/ml，Ad-HGF的病毒滴度為1.6×109 pfu/ml。大鼠MSCs傳代后細胞均一性好、純度高，呈長

3、梭樣，放射狀或柵欄樣生長，MSCs表面特異性抗原CD29、CD90、CD44表達陽性，而CD34、CD11b為陰性表達；隨著病毒感染復數(shù)(MOI值)的增大，重組腺病毒對MSCs的轉染效率增加，當MOI值為150時，轉染率為100％；ELISA檢測結果顯示：Ad-HGF感染MSCs第8天，HGF表達含量達到峰值(22ng/ml)，16天時，仍可檢測到HGF；RT-PCR結果示：Ad-HGF感染MSCs第11天時同樣仍可觀察到HGFmRNA

4、的表達。 結論：①通過貼壁細胞分離法、密度梯度離心法及流式細胞儀可分離、純化并鑒定大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞。②腺病毒對MSCs有較高的轉染效率。③Ad-HGF感染MSCs后，HGF可有效表達。 目的：探討Ad-HGF轉染的骨髓間充質(zhì)干細胞移植對大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響及可能機制。 方法：建立UUO大鼠模型，隨機分為UUO組、Ad-HGF修飾MSCs移植組、假手術組，并于術后3、7、14、28 d檢測血肌酐(Scr)、尿

5、素氮(BUN)，免疫組化測腎組織HGF、a-平滑肌肌動蛋白(a-SMA)的表達，HE染色觀察腎組織的病理改變，冰凍切片熒光顯微鏡下觀察移植細胞在腎組織的定位，RT-PCR法檢測纖維連接蛋白(FN)和a-SMA mRNA的表達。 結果：在移植術后3、7、14 d大鼠腎臟冰凍切片上可以見到DAPI標記的移植細胞；與假手術組相比，術后第7d，UUO組、移植組Scr、BUN值顯著升高，術后第14d，UUO組、移植組Scr、BUN值下降但

6、仍明顯高于假手術組(P＜0.05)，UUO組、移植組之間無顯著差異(P＞0.05)；術后第28d，移植組Scr值低于UUO組(P＜0.05)。與假手術組相比，UUO組、移植組a-SMA表達增高，移植組HGF表達較UUO顯著增加。隨著梗阻時間的延長，F(xiàn)N、a-SMA mRNA的表達逐漸增加(P＜0.05)，術后第14d，移植組a-SMA mRNA的表達低于UUO組(P＜0.05)；術后第28d，移植組FN、a-SMA mRNA的表達均低于