1、目的：分離大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC)并進(jìn)行體外培養(yǎng)，研究類胰蛋白酶對(duì)HSC的影響，探討類胰蛋白酶在肝纖維化中的作用及機(jī)制。 方法：采用percoll密度梯度離心法分離大鼠HSC，經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)和熒光顯微鏡下鑒定后，加入不同濃度的類胰蛋白酶將HSC分為四組，即：①0ng/ml類胰蛋白酶組；②1ng/ml類胰蛋白酶組；③10ng/ml類胰蛋白酶組；④100ng/ml類胰蛋白酶組，36h后用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)

2、HSC的增殖，用半定量反轉(zhuǎn)錄.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)Ⅰ型膠原、蛋白水解酶激活受體-2(PAR-2)及內(nèi)源性過氧化物酶體增殖因子活化受體-γ(PPAR-γ)mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1、新分離的細(xì)胞在熒光顯微鏡328 nm波長的紫外光激發(fā)下，可觀察到藍(lán)綠色的自發(fā)熒光；免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示所培養(yǎng)的細(xì)胞Desmin蛋白陽性，證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞是HSC； 2、類胰蛋白酶在(1～100)ng/ml范圍內(nèi)，以劑量

3、依賴方式促進(jìn)HSC增殖(P<0.05)，最高達(dá)對(duì)照組的1.64倍。 3、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml類胰蛋白酶均可使培養(yǎng)的HSC Ⅰ型膠原、PAR-2 mRNA的表達(dá)增強(qiáng)，使PPAR-γmRNA的表達(dá)抑制，此作用呈劑量依賴性(P<0.05)，分別達(dá)對(duì)照組的1.29、1.32、1.47倍。 結(jié)論：類胰蛋白酶可以刺激HSC增殖，并促進(jìn)PAR-2和I型膠原mRNA的高表達(dá)及PPAR-γmRNA的低表達(dá)，提示類