1、試驗(yàn)1：首先利用小鼠胚胎進(jìn)行冷凍試驗(yàn)，小鼠經(jīng)超數(shù)排卵，取胚胎進(jìn)行常規(guī)冷凍，每支細(xì)管裝3枚左右的胚胎。在室溫下，將胚胎直接放入裝有無(wú)水乙醇的ET-1N型冷凍儀內(nèi)，以3℃/分的速率降溫至-6.5℃，誘發(fā)結(jié)冰，繼續(xù)停留10分鐘，然后以0.3℃/分的速率降溫至-29.5℃，然后以0.1℃/分的速率降溫至-33℃，取出胚胎細(xì)管，直接投入液氮中保存。 玻璃化細(xì)管法進(jìn)行小鼠胚胎冷凍，試驗(yàn)利用EFS40玻璃化液冷凍小鼠胚胎，平衡2min后投入液

2、氮中保存，解凍時(shí)在室溫25℃水中進(jìn)行解凍。輕輕振動(dòng)約10s鐘后取出。常規(guī)冷凍胚胎可利用率為35.85％，玻璃化冷凍胚胎可利用率為45.45％。 試驗(yàn)2：取經(jīng)FSH超排的綿羊胚胎，經(jīng)常規(guī)冷凍和玻璃化細(xì)管法以及開(kāi)放式細(xì)管法(OPS法冷凍)，本研究應(yīng)用EFS40和EDFS40玻璃化液對(duì)3～3.5日齡和6～6.5日齡的綿羊胚胎進(jìn)行玻璃化冷凍，每支細(xì)管裝2枚左右的胚胎。在現(xiàn)階段國(guó)內(nèi)外最新胚胎冷凍保存研究成果上，在綿羊胚胎上首次采用OPS法

3、與傳統(tǒng)細(xì)管法進(jìn)行比較，玻璃化試劑EDFS40也首次在綿羊鮮胚中應(yīng)用，并且EFS40和EDFS40玻璃化試劑對(duì)綿羊體內(nèi)受精胚胎冷凍進(jìn)行研究比較，解凍使用0.5M蔗糖或胚胎存放液脫出防凍劑，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定后移植到受體。 綿羊超排共回收104枚胚胎，胚胎形態(tài)完整數(shù)達(dá)85枚，其中常規(guī)冷凍法透明帶完整率13/15(86.67％)，形態(tài)完整率10/13(76.92％)，妊娠率7/9(77.78％)，產(chǎn)子率3/7(42.85％)；一步細(xì)管法透明

4、帶完整率12/14(85.71％)，形態(tài)完整率10/12(83.33)，妊娠率6/9(66.67％)，，產(chǎn)子率2/6(33.33％)，二步細(xì)管法透明帶完整率16/16(100％)，形態(tài)完整率13/16(81.25％)，妊娠率9/11(81.81％)，產(chǎn)子率5/9(55.56％)；OPS法透明帶完整率27/27(100％)，形態(tài)完整率22/27(81.48％)，妊娠率15/20(75％)，產(chǎn)子率8/15(53.33％)。 本試驗(yàn)研

5、究表明：綿羊胚胎應(yīng)用EFS40和EDFS40玻璃化液冷凍，解凍后利用蔗糖或胚胎存放液脫除保護(hù)劑，經(jīng)鑒定移植得到較高的妊娠率和胚胎存活率。并且在綿羊體內(nèi)受精胚胎上首次采用OPS開(kāi)放式細(xì)管法進(jìn)行胚胎冷凍，也取得很好的效果。玻璃化冷凍技術(shù)不需要特殊的冷凍儀設(shè)備，并且操作程序簡(jiǎn)單、省時(shí)，該過(guò)程不必由專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行操作，且脫除抗凍劑的解凍液配制比較簡(jiǎn)單，使用效果好、利于在現(xiàn)場(chǎng)條件下操作，與傳統(tǒng)胚胎冷凍方法相比具有明顯優(yōu)勢(shì)，有利于加速綿羊品種改良