1、惡性胸腔積液是許多腫瘤的一種常見的晚期臨床癥狀，包括肺癌和乳腺癌等。利用細(xì)胞學(xué)檢測法來鑒定胸腔積液是良惡性存在敏感性較低、主觀性較強(qiáng)的弊端，容易造成漏診或誤診，另外化療藥灌注伴隨有嚴(yán)重的毒副作用，因此需要尋找新的更敏感可靠的檢測指標(biāo)是非常重要的。一些研究已經(jīng)證實了巨噬細(xì)胞在惡性胸腔積液腫瘤微環(huán)境中作為一種調(diào)節(jié)性細(xì)胞發(fā)揮著重要的作用。我們猜測腫瘤相關(guān)性巨噬細(xì)胞可以作為鑒定惡性胸腔積液較為敏感的生物學(xué)標(biāo)志與治療的靶點。本實驗中我們選取50例

2、惡性胸腔積液患者以及50例非惡性胸腔積液患者的胸腔積液與外周血，其中惡性胸腔積液均經(jīng)細(xì)胞學(xué)鑒定發(fā)現(xiàn)有腫瘤細(xì)胞。采用流式細(xì)胞儀檢測了巨噬細(xì)胞亞型，再利用qRT-PCR技術(shù)分析了惡性與非惡性胸腔積液患者的CD14+單核/巨噬細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)水平。然后采用雙盲實驗進(jìn)行進(jìn)一步驗證;采用統(tǒng)計學(xué)方法Student'st-test、秩和檢驗以及ROC進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在所有胸腔積液中均表達(dá)CD14+巨噬細(xì)胞，并且在惡性胸腔積液中高表達(dá)，與非惡性胸腔

3、積液比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。在惡性胸腔積液中高表達(dá)抑炎性細(xì)胞因子，在非惡性胸腔積液中高表達(dá)促炎性細(xì)胞因子(p＜0.05)。提示惡性胸腔積液是一種免疫抑制性微環(huán)境。更重要是CD163+CD14+細(xì)胞在惡性胸腔積液中特異性高表達(dá)，與炎性胸腔積液相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。但是在外周血中幾乎不表達(dá)。當(dāng)選取3.65％作為Cutoff值時，CD163+CD14+做為鑒定肺癌患者惡性胸腔積液的特異性為100％,敏感度為86％，在40例雙

4、盲實驗中，特異性為100％，敏感度為78.9％，共140例胸腔積液的檢測結(jié)果顯示CD163+CD14+巨噬細(xì)胞在惡性胸腔積液中特異性高表達(dá)，進(jìn)一步驗證CD163+CD14+巨噬細(xì)胞可以作為惡性胸腔積液的特異性標(biāo)志。并且發(fā)現(xiàn)CD163+CD14+巨噬細(xì)胞(M2型TAM)，主要分泌抑炎性細(xì)胞因子，因此促進(jìn)M2型向M1型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化可以作為治療惡性胸腔積液的新戰(zhàn)略。銅綠假單胞菌已經(jīng)被證實通過活化固有免疫細(xì)胞包括巨噬細(xì)胞、DC細(xì)胞進(jìn)而激活免疫系

5、統(tǒng)，本實驗中通過CD14磁珠分離來自惡性胸腔積液患者的單核細(xì)胞，體外加入銅綠假單胞菌藥物處理6h，利用qRT-PCR技術(shù)分析惡性胸腔積液中TAM相關(guān)基因在加藥處理后基因水平的變化。結(jié)果顯示抑炎性細(xì)胞因子如Arginase-Ⅰ、TGF-β下調(diào)，促炎性細(xì)胞因子如iNOS，TNF-α上調(diào)，另外藥物作用會誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)性巨噬細(xì)胞高表達(dá)TLR4?？傊?，銅綠假單胞菌可以通過上調(diào)TLR4進(jìn)而逆轉(zhuǎn)腫瘤相關(guān)性巨噬細(xì)胞的表型與功能，因此我們提出初步的理論，認(rèn)