1、該實(shí)驗(yàn)通過(guò)RT-PCR方法從外周血單個(gè)核細(xì)胞中擴(kuò)增出P21、P27、P16、P15基因,膠純化回收后連接到T載體測(cè)序,序列正確后分別構(gòu)建P21-pcDNA3.1、P27-pcDNA3.1、P16-pcDNA3.1、P15-pcDNA3.1真核表達(dá)載體,將四種重組構(gòu)建的載體分別以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染入慢粒急變、紅白血病-K562細(xì)胞株,經(jīng)G418篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了四種重組載體的K562細(xì)胞株,分別命名為P21-pcDNA3.1-K562、P27-p

2、cDNA3.1-K562、P16-pcDNA3.1-K562及P15-pcDNA3.1-K562細(xì)胞株.Western blot證實(shí)轉(zhuǎn)染后分別有P21、P27、P16、P15蛋白的表達(dá),證明轉(zhuǎn)染成功.用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率,了解轉(zhuǎn)染后對(duì)k562細(xì)胞的增殖抑制作用;用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡.同時(shí),結(jié)合對(duì)STI571、HMBA的研究,了解STI571與P21、P27、P16、P15基因克隆聯(lián)合作用后對(duì)于K562細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及凋

3、亡等的影響.為指導(dǎo)慢粒的治療提供了新的方法和途徑.該實(shí)驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論如下:1.STI571能明顯抑制k562細(xì)胞增殖,細(xì)胞阻滯于G0/G1期,且具有明顯的誘導(dǎo)凋亡作用.2.HMBA能抑制k562細(xì)胞增殖,細(xì)胞阻滯于G0/G1期,誘導(dǎo)凋亡,未誘導(dǎo)K562細(xì)胞向紅系分化.3.成功構(gòu)建了P21、p27、p16、P15基因的真核表達(dá)載體,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染入K562細(xì)胞后均發(fā)揮G1期阻滯及抑制細(xì)胞增殖作用.4.STI571和p27、p16、P15基因克隆聯(lián)