1、研究從豬血中分離提取氯化血紅素和凝血酶的工藝，建立了其定性和定量的分析方法。 豬血的抗凝處理、紅細胞和血漿的分離。收集經(jīng)檢驗合格的新鮮豬血，用0.38％的檸檬酸鈉溶液與血液按體積比1：9混合抗凝，抗凝血在轉速為4000r/min(離心力為1790g)下，離心10min，分別收集紅細胞和血漿，用于提取氯化血紅素和凝血酶。 研究了氯化血紅素的提取條件。優(yōu)化后的條件為：(1)加入紅細胞體積1/5的去離子水，實驗條件下，超聲波功

2、率200W，破碎10min，得到血紅蛋白溶解液。(2)選用鞣酸法從超聲波破碎紅細胞得到的血紅蛋白溶解液中提取氯化血紅素。向血紅蛋白溶液中加入紅細胞體積5倍的丙酮，用1mol/L稀HCl調其pH值為2.2，抽濾，收集提取液。向提取液中加入5％鞣酸，靜置12h后產生沉淀。抽濾，收集沉淀，并對其用去離子水、50％的乙酸、95％乙醇、乙醚依次各洗滌二次，所得產品放入干燥器避光干燥，最后得到紅紫色固體。通過分析對比氯化血紅素標準品和樣品的紅外光譜

3、圖和紫外/可見光譜圖，確定所得產品為氯化血紅素。 利用該工藝每1000ml豬血可以獲得氯化血紅素3.2克左右，純度達到91％左右，收率為78％左右。用超聲波法代替機械攪拌法對紅細胞進行破碎，時間縮短了2/3，使氯化血紅素的收率提高了15％左右。 建立和優(yōu)化了凝血酶的分離純化的條件：(1)血漿的預處理。血漿-20℃下冷凍一天，4℃解凍，可除去纖維蛋白原，所得凝血酶的總活性提高了3.7％。(2)凝血酶原的分離采用檸檬酸鋇吸附

4、法。1mol/L的氯化鋇最適加入量為血漿體積的8％。(3)凝血酶原激活采用單獨使用CaCl2法。通過研究Ca2+終濃度、激活溫度、時間對凝血酶原激活的影響，獲得優(yōu)化后的激活條件為：Ca2+的終濃度為0.1mol/L，在25℃下激活2h。(4)采用DEAE-纖維素DE-52對凝血酶粗品進行純化，pH7.2、0.05mol/LTris-HCl緩沖液上樣，用含0～1.0mol/LNaCl的pH7.2、0.05mol/LTris-HCl緩沖液進

5、行線性梯度洗脫，收集凝血酶活性峰，凝血酶的比活達到604.4U/mg，回收率為74.3％，純化倍數(shù)為15.7。再經(jīng)SephadexG-75進一步純化，用pH7.2、0.05mol/LTris-HCl緩沖液上樣、洗脫，得到凝血酶電泳單點純，比活為998.6U/mg，回收率為55.7％，純化倍數(shù)為25.9。 通過對血漿進行冷凍處理，使所得凝血酶的總活力提高了3.7％，同時也得到了凝血酶的底物—纖維蛋白原。單獨使用CaCl2激活凝血酶