1、　　基因多態(tài)性與人類疾病發(fā)生與發(fā)展的內(nèi)在聯(lián)系是當(dāng)前國際上臨床醫(yī)學(xué)十分重視的前沿性課題。近幾年來,在腎臟病領(lǐng)域這方面的工作較活躍,取得了初步成就。同一種腎臟疾病,臨床表現(xiàn)及預(yù)后常存在著明顯差異,在中國人和西方人之間其表現(xiàn)可以懸殊很大。以往?；\統(tǒng)地歸咎于個體遺傳體質(zhì)的不同,而疾病基因多態(tài)性的研究為我們提供了新的認識。終末期腎功能衰竭(ESRD)是嚴重危害人們健康的疾病之一,發(fā)病率為1/1000,盡管經(jīng)透析療法,每年平均是死亡率達20%。Ig

2、A腎病(IgA nephropathy),為各類原發(fā)性腎小球疾病最常見的類型,是導(dǎo)致ESRD的主要疾病,世界范圍的發(fā)病率為1.3%。在新加坡,Woo KT報導(dǎo)該病占各類原發(fā)性腎小球疾病腎臟活檢病人的52%。以往該疾病被認為預(yù)后良好,呈被稱為良性家族性血尿,但經(jīng)長期隨訪發(fā)現(xiàn),有9%到50%的IgA腎病病人于發(fā)病20年內(nèi)進展到終末期腎功能衰竭。IgA腎病是不同病因引起的具有相同免疫病理學(xué)特征的腎小球疾病。發(fā)病原因有多種,包括環(huán)境因素,遺傳因

3、素,IgA1分子本身結(jié)構(gòu)異常以及各種炎癥因子的作用。據(jù)報導(dǎo),嚴重蛋白尿,尿蛋白大于1g/d、高血壓、高血脂、腎功能持續(xù)下降；腎病理表現(xiàn)為腎小球硬化、新月體形成伴球囊粘連,中度或重度腎小管一間質(zhì)病變者,均預(yù)后不良,但這些癥狀的出現(xiàn)提示腎功能已經(jīng)受到較嚴重損傷,能否對疾病進行早期預(yù)測,避免發(fā)展到ESRD是當(dāng)前研究的熱點。
　　IgA腎病發(fā)生具有地域性和家族聚集的特點。它的發(fā)生在不同洲、不同國家或在一個國家不同地區(qū)的差異很大,黑色人種的

4、發(fā)病率明顯低,而且IgA腎病患山東大學(xué)博士學(xué)位論文者家族成員的免疫學(xué)研究已發(fā)現(xiàn)與患者有類似的異常免疫學(xué)反應(yīng)。說明遺傳易感因素在IgA腎病發(fā)病中的重要性。有報導(dǎo)顯示IgA腎病的發(fā)生率與主要主組織相容性I類抗原(HLA一BW35)及11類抗原(HLA一DRBI)出現(xiàn)的頻率明顯相關(guān),且有明顯的家族聚集的特點。新近有學(xué)者報道IgA腎病的發(fā)生與染色體6q22一23之間存在連鎖關(guān)系?？梢娺z傳因素在IgA腎病的發(fā)生中起至關(guān)重要的作用。如能找到與IgA

5、腎病的發(fā)生關(guān)的基因。將有助于對IgA腎病進行風(fēng)險預(yù)測和新的藥物篩選及治療措施的制定。 人類基因組共包括約30億個堿基,人類基因組計劃已基本測出了這30億個堿基的排列順序。不同人之間基因組的堿基排列順序絕大多數(shù)一致,但也存在著極小差異,這種遺傳性變異被稱作“單核昔酸多態(tài)性”,即SNP。人類基因組中約有1000萬個SNPs,不同人之所以對疾病的易感程度有所區(qū)別、對藥物會產(chǎn)生不同反應(yīng),據(jù)認為部分受到SNP影響決定。識別出人類基因組的所有“單核

6、昔酸多態(tài)性”,在醫(yī)療上的重要性不言而喻。理論上,可以通過對整個人類基因組的分析來實現(xiàn),但工作量太大?？茖W(xué)家們發(fā)現(xiàn),在DNA上位置比較接近的很多SNPs,會組成所謂“單倍型塊(h apfotyPe)”,并可作為一個整體而遺傳；而且,通過極少數(shù)的幾個標(biāo)記SNPs,就可以識別出不同的“單倍型塊”。繪出人類基因組的“單倍型塊”,以及不同“單倍型塊”的標(biāo)記SNPs,有望為尋找人體致病基因提供一條捷徑。 腎素一血管緊張素系統(tǒng)(RAS)在血壓和體液的

7、平衡的調(diào)節(jié)起非常重要的作用。其中血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)的作用尤為重要,它催化無活性的血管緊張素I(ATI)轉(zhuǎn)化為具有強縮血管活性的血管緊張素11(ATll),以及催化舒血管的緩激膚水解,使其失去舒血管活性,最終使收縮血管,升高血壓。關(guān)于血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因即ACE多態(tài)性的研究很多,其中絕大多數(shù)研究都是對分布在第16個內(nèi)含子287堿基的Alu重復(fù)序列插入和缺失的研究。據(jù)報導(dǎo)該基因多態(tài)性與血漿ACE酶的活性變化明顯有關(guān),D等位基因攜帶者

8、具有潛在心肌梗死和左心室肥厚的危險性。對于慢性進展性IgA腎病和糖尿病腎病患者,D等位基因攜帶者容易較快進展到ESED,還有研究表明DD基因型患者對血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)有較好的治療反應(yīng)。但是研究結(jié)果不相一致。山東大學(xué)博士學(xué)位論文 本研究中,我們抽取12例樣本進行ACE基因組序列測定,對所有SNPs進行識別,然后選取少數(shù)有意義的SNPs進行大樣本(100病人,100正常對照)鑒別,對其進行連鎖不平衡(LD)分析,識別出不同的

9、“單倍型塊”。試圖找到疾病相關(guān)的基因單倍型塊。目前為止,我們沒有發(fā)現(xiàn)對亞洲裔ACE基因全基因序列多態(tài)性的相關(guān)研究,僅見形eder研究小組對5例非洲裔的美國人和6例歐州裔的美國人進行ACE基因序列研究,且均為正常人。本研究為首次對華人進行ACE全核營酸序列測定,其中包括8例IgA腎病患者。 目的：選8例IgA腎病患者以及4例正常對照進行ACE全序列分析,然后選取大樣本(100病人,100正常對照)對少數(shù)有意義的SNPs鑒別,對其進行連鎖不

10、平衡(LD)分析,識別出不同的“單倍型塊”。試圖找到疾病相關(guān)的基因單倍型塊。以期找到與IgA腎病相關(guān)的核昔酸多態(tài)性,并比較種族之間的差異。 方法：入選病例來自新加坡中央醫(yī)院腎臟內(nèi)科于1978年至2000年住院并進行腎活檢確診的IgA腎病患者,均符合原發(fā)性IgA腎病診斷標(biāo)準。正常對照組均排除腎臟疾病及其他慢性疾病。 首先,采用PCR法將包括點突變的基因片段擴增,再經(jīng)核昔酸序列分析即可發(fā)現(xiàn)sNP位點。nNA抽提按照QIAamp nNA bl