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文檔簡介
1、目的:本實驗通過建立IgA腎病大鼠模型,應用益氣養(yǎng)陰中藥對大鼠模型進行干預治療,檢測實驗大鼠的尿紅細胞計數(shù)、24小時尿蛋白定量、腎臟病理學變化,免疫組織化學法及RT-PCR法檢測血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)在大鼠腎臟組織中的表達,放射免疫法測定大鼠血清中血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的水平,以探究益氣養(yǎng)陰中藥對IgA腎病的治療作用及可能的作用機制,為臨床應用提供實驗基礎以及理論依據(jù)。
方法:選取40只體重在150-200g左右的SPF
2、級雄性SD大鼠,適應性飼養(yǎng)1周過后,隨機分為正常組、模型組、益氣養(yǎng)陰組及貝那普利組。除正常組外,模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組,均運用以下方法復制大鼠IgAN模型,具體如下:將免疫原BSA(美國Sigma公司)配制成100g/L濃度,隔天灌胃,劑量為400mg/kg,持續(xù)8周;每周一次皮下注射四氯化碳0.1ml、蓖麻油0.3ml,連續(xù)9周;并于第六周尾靜脈注射脂多糖(美國Sigma公司)0.05mg。正常組分別予以等量的純凈水隔天灌胃,
3、持續(xù)8周;每周一次皮下注射生理鹽水0.4ml連續(xù)9周;并于第六周尾靜脈注射等量生理鹽水。第10周起,貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組分別予以鹽酸貝那普利片、相應中藥灌胃,正常組、模型組予以等量純凈水灌胃,持續(xù)8周。分別于3周末、6周末、9周末、13周末、17周末用代謝籠收集各個組大鼠的尿液,以測定24h尿蛋白定量及尿紅細胞計數(shù),實驗末即第17周末,斷頭處死實驗動物,股動脈取血,血清離心后測定腎功能,迅速采集大鼠腎臟標本。光鏡觀察大鼠腎臟組織病理學
4、改變。RT-PCR及免疫組化法測定ACE在腎臟組織的表達情況,放射免疫法測定血清中AngⅡ水平。
結(jié)果:
1.益氣養(yǎng)陰方藥對IgA腎病大鼠24h尿蛋白定量的影響正常組的大鼠在第3周末、第6周末、第9周末、第13周末、第17周末測得的尿蛋白比較,均沒有明顯差異(P>0.05)。
造模開始后,模型組與各治療組的大鼠于造模的第6周末開始出現(xiàn)蛋白尿,并且尿蛋白呈進行性增長,于第9周末達到最高,其與正常組相比較,差異
5、有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
給藥后,各治療組大鼠于4周后尿蛋白開始下降,與模型組相比24h尿蛋白定量明顯減少(P<0.05);益氣養(yǎng)陰組和貝那普利組間比較,無顯著差異(P>0.05)。
2.益氣養(yǎng)陰方藥對IgA腎病大鼠尿紅細胞計數(shù)的影響正常組的大鼠在整個實驗中,均未出現(xiàn)血尿。
造模開始后,模型組與治療組大鼠于第6周末開始出現(xiàn)血尿,其尿紅細胞計數(shù)與對照組相比顯著增多(P<0.05),并且呈進行性增多,于第
6、9周末達到高峰,與正常組相比,其差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
給藥后,益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細胞計數(shù)在治療4周后開始下降,其與模型組相比明顯降低(P<0.05);貝那普利組大鼠尿紅細胞計數(shù)與模型組相比有所下降,但二者之間無顯著差異(P>0.05)。
3.對IgA腎病大鼠Scr、BUN的影響正常組、模型組、益氣養(yǎng)陰組、貝那普利組,血清Scr、BUN比較:各組之間差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
4.腎臟
7、病理學的改變光鏡下,正常組大鼠的腎小球結(jié)構(gòu)完整,腎小球基質(zhì)、系膜未見明顯的異常改變;模型組大鼠可以見到腎小球系膜細胞增生和系膜基質(zhì)增多;益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組也都有不同程度的病理改變,但和模型組相比較病變較輕。
免疫熒光示:正常組大鼠腎小球系膜區(qū)未見或少見IgA沉積,模型組大鼠可以見到IgA沿腎小球系膜呈團塊狀分布,益氣養(yǎng)陰組和貝那普利組也可見到有不同程度IgA的沉積,但與模型組相比較輕。
5.RT-PCR和免疫組化
8、對腎臟組織中ACE表達的影響RT-PCR結(jié)果示:和正常組相比,模型組、益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組大鼠ACE在腎臟組織的表達明顯升高(P<0.05);與模型組比較,益氣養(yǎng)陰組與貝那普利大鼠ACE在腎臟組織的陽性表達明顯減弱(P<0.05);但益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組間無明顯差異(P>0.05)。
免疫組化染色示:和正常組相比,模型組、益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組大鼠ACE在腎臟組織的陽性表達增強(P<0.05);與模型組比較,益氣養(yǎng)陰組與貝
9、那普利組大鼠ACE在腎臟組織的陽性表達減弱(P<0.05);但益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組間無明顯差異(P>0.05)。
6.放射免疫法測定血清AngⅡ水平與正常組相比較,模型組、益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組大鼠血清中AngⅡ水平升高(P<0.05);與模型組比較,益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組大鼠血清中AngⅡ水平降低(P<0.05);但益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組間無明顯差異(P>0.05)。
結(jié)論:
1.益氣養(yǎng)陰方藥可以明顯減
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