1、自然殺傷（Natural killer, NK）細胞是哺乳動物以及其他脊椎動物天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分，具有抗腫瘤、抗病毒感染的作用。NK細胞發(fā)揮殺傷功能與活化性受體與抑制性受體介導的信號傳遞有關。近年來，雞 NK細胞的研究也逐漸受到重視，研究的主要困難在于缺乏確定的NK細胞表面標志。b-nk基因編碼的BNK蛋白是表達于雞NK細胞表面的C型凝集素樣受體蛋白。BNK是高度糖基化的Ⅱ型跨膜蛋白，胞質尾區(qū)有一個免疫受體酪氨酸抑制基序，與哺乳

2、動物NK細胞受體結構相似，因此推測BNK蛋白是雞NK細胞的潛在受體。
　　b-nk基因位于雞的主要組織相容性復合體（Major histocompatibility complex, MHC）核心區(qū)域，與MHC-B核心基因緊密連鎖。本研究利用國家禽類實驗動物種子中心保存的MHC單倍型雞BW/G1等6個品系，包括B19、B21等MHC-B單倍型，根據NCBI上公布的不同單倍型雞的b-nk基因序列，比較了單倍型雞的b-nk基因多態(tài)性，

3、生物信息學分析結果與標準單倍型序列完全一致，表明可以利用b-nk基因進行MHC單倍型雞遺傳穩(wěn)定性監(jiān)測，同時也為后續(xù)實驗提供了實驗材料。
　　以對多種疫病有較強敏感性的B19單倍型雞b-nk基因原核表達蛋白（BNK19）免疫小鼠，建立間接ELISA方法，篩選獲得一株單克隆抗體雜交瘤細胞株7A10，與原核表達的BNK21沒有Western Blot反應性，具有鑒別意義。截短表達分析結果表明，7A10針對表位在E149-S168之間。<

4、br>　　從B19單倍型雞外周血中分離淋巴細胞，刀豆素-A刺激后，提取細胞總RNA，RT-PCR方法擴增b-nk19基因，插入真核表達載體pIRES，成功構建真核表達載體pIRES-BNK19，轉染CHO細胞系，用G418加壓篩選獲得穩(wěn)定表達BNK19的細胞系。
　　7A10單抗能夠通過Western Blot檢測到雞外周血淋巴細胞中BNK蛋白的表達。利用流式細胞儀檢測，7A10標記細胞占雞外周血淋巴細胞的16.7％。本實驗為BN