1、[目的]
　　肺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，也是全世界惡性腫瘤中致死率最高的疾病。肺癌的發(fā)生發(fā)展涉及多基因的參與，肺癌治療主要依賴傳統(tǒng)的手術(shù)、放療和化療，但是總體療效并不理想。目前，肺癌基因治療作為新型的治療方式，已逐漸成為肺癌的一種高效性、特異性、靶向性強(qiáng)的治療方法，并日益受廣大醫(yī)學(xué)工作者的重視。尋找肺癌基因治療的新靶點(diǎn)，進(jìn)而探索肺癌增殖、遷移的分子機(jī)制，有利于肺癌的早期診治。研究發(fā)現(xiàn)，乙酰基轉(zhuǎn)移酶Tip60(HIV-tat in

2、teracting protein60kD)是一個(gè)單倍體不足(haplo-insufficient)的腫瘤抑制因子，它在肺癌組織中的基因轉(zhuǎn)錄水平較正常組織下調(diào)，肺癌組織中過(guò)表達(dá)Tip60能誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。但關(guān)于Tip60與肺癌增殖、遷移等分子機(jī)制的研究至今仍未見(jiàn)有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本課題擬研究Tip60對(duì)肺癌細(xì)胞增殖、遷移及衰老表型的影響，并初步探討其機(jī)制，為肺癌患者的基因治療提供一個(gè)新的思路和手段。
　　[方法]

3、　　構(gòu)建了在真核細(xì)胞中能穩(wěn)定過(guò)表達(dá)Tip60的慢病毒載體，感染肺癌A549細(xì)胞建立相應(yīng)的細(xì)胞系。采用qRT-PCR和Western blotting等方法驗(yàn)證Tip60過(guò)表達(dá)是否成功。采用CCK-8法、細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期。Western blotting檢測(cè)肺癌細(xì)胞中周期相關(guān)蛋白CDK2、P21和P53的表達(dá)水平。采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力。采用衰老相關(guān)半乳糖苷酶

4、(SA-β-gal)染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Tip60過(guò)表達(dá)與肺癌細(xì)胞衰老表型之間的關(guān)系。
　　[結(jié)果]
　　1.成功構(gòu)建Tip60過(guò)表達(dá)的A549細(xì)胞，Tip60的轉(zhuǎn)錄水平上升了30倍，蛋白水平也明顯上調(diào)。
　　2.Tip60過(guò)表達(dá)抑制了A549細(xì)胞的增殖，影響了細(xì)胞周期的分布，使A549細(xì)胞S期的分布明顯減少。
　　3.A549細(xì)胞中Tip60過(guò)表達(dá)，CDK2蛋白水平下調(diào)，P21和P53的蛋白水平均上調(diào)。
　　4.

5、Tip60過(guò)表達(dá)抑制了A549細(xì)胞的傷口愈合能力，遷移能力也明顯受限。
　　5.Tip60過(guò)表達(dá)沒(méi)有影響A549細(xì)胞衰老表型的改變。
　　[結(jié)論]
　　Tip60過(guò)表達(dá)抑制了A549細(xì)胞的增殖，抑制細(xì)胞從G1期過(guò)度到S期，這可能與CDK2水平下調(diào)，P21和P53的蛋白水平上調(diào)相關(guān)，通過(guò)這些蛋白的作用途徑影響肺癌細(xì)胞增殖。Tip60過(guò)表達(dá)抑制了A549細(xì)胞的傷口愈合能力，細(xì)胞的遷移能力也明顯受限。Tip60過(guò)表達(dá)沒(méi)有影響