1、糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy,DPN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)最常見的慢性并發(fā)癥之一,其發(fā)病率高達(dá)47％～91％,是DM患者致殘甚至致死的主要因?yàn)橹?。由于DPN的高發(fā)病率和高致殘率,DPN的防治已成為DM研究的重要課題。DPN的發(fā)病機(jī)制尚不十分明了,進(jìn)一步探討DPN發(fā)病機(jī)制對預(yù)防和治療DPN具有十分重要的意義。
　　 近年來,中藥多靶點(diǎn)治療疾病受到

2、越來越多的關(guān)注。以往的研究證實(shí),中藥遠(yuǎn)志(Polygala)對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有保護(hù)作用,但關(guān)于遠(yuǎn)志對周圍神經(jīng)病變作用的研究國內(nèi)外報(bào)道較少。
　　 本研究采用腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立DPN大鼠模型,探討遠(yuǎn)志對DPN大鼠坐骨神經(jīng)及其相關(guān)神經(jīng)元胞體的保護(hù)作用,為預(yù)防和治療DPN提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 第一部分遠(yuǎn)志對DPN大鼠坐骨神經(jīng)的保護(hù)作用
　　 目的:
　　 本

3、研究采用腹腔注射STZ誘導(dǎo)建立DPN大鼠模型,通過觀察大鼠坐骨神經(jīng)形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的變化,研究遠(yuǎn)志對DPN大鼠坐骨神經(jīng)的保護(hù)作用,進(jìn)一步探討DPN的發(fā)病機(jī)制,為治療和預(yù)防DPN提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 雄性Wistar大鼠48只,隨機(jī)分為4組:正常對照組、DPN模型組、遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組,每組12只。DPN模型組、遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠均建立STZ致DM模型。待DM模型建立后,遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠給予

4、遠(yuǎn)志(2.7g生藥／kg／d)灌胃6周；DPN模型組和遠(yuǎn)志治療組大鼠以尾部感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度(sense nerve conduction velocity,SNCV)<30m／s為標(biāo)準(zhǔn)建立DPN模型。DPN模型建立后,遠(yuǎn)志治療組大鼠給予同等劑量遠(yuǎn)志灌胃6周。
　　 分別測定大鼠血糖(blood glucose,BG)和尾部SNCV,紫外分光光度法測定大鼠坐骨神經(jīng)醛糖還原酶(aldose reductase,AR)活性,光鏡、電鏡

5、下觀察大鼠坐骨神經(jīng)的形態(tài)結(jié)構(gòu),免疫組織化學(xué)方法觀察大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)微絲蛋白(neurofilament protein,NFP)的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1各組大鼠BG
　　 DPN模型組大鼠BG為(25.40±4.22)mmol／L,明顯高于正常對照組大鼠(P<0.01)。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠BG分別為(15.80±5.60)mmol／L、(17.20±4.56)mmol／L,均明顯低于DPN模型組大

6、鼠(P<0.01)。
　　 2各組大鼠尾部SNCV
　　 DPN模型組大鼠尾部SNCV為(27.45±1.16)m／s,明顯低于正常對照組大鼠(P<0.01)。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠尾部SNCV分別為(33.01±1.98)m／s、(33.20±1.09)m／s,均明顯高于DPN模型組大鼠(P<0.01)。
　　 3各組大鼠坐骨神經(jīng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)
　　 光鏡下正常對照組大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)纖維髓鞘結(jié)構(gòu)完整,軸

7、索清晰可見；DPN模型組大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)纖維髓鞘結(jié)構(gòu)模糊,軸索萎縮變性,部分神經(jīng)纖維橫切面呈空泡樣；遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)纖維的形態(tài)結(jié)構(gòu)均明顯好于DPN模型組大鼠。
　　 電鏡下DPN模型組大鼠坐骨神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維髓鞘結(jié)構(gòu)散亂、板層分離；部分神經(jīng)纖維微管及微絲斷裂、溶解；軸索內(nèi)線粒體嵴斷裂、腫脹變性。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組坐骨神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維的超微結(jié)構(gòu)均明顯好于DPN模型組大鼠。
　　 4各組大鼠坐骨神經(jīng)

8、AR活性
　　 DPN模型組大鼠坐骨神經(jīng)AR活性為(1.0695±0.1811)U／mgprot,明顯高于正常對照組大鼠(P<0.01)。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠坐骨神經(jīng)AR活性分別為(0.6266±0.1633)U／mgprot、(0.3475±0.1068)U／mgprot,均明顯低于DPN模型組大鼠(P<0.01)。
　　 5各組大鼠坐骨神經(jīng)NFP的表達(dá)
　　 NFP免疫陽性產(chǎn)物為棕黃色細(xì)膩顆粒,位于坐骨

9、神經(jīng)軸索。DPN模型組大鼠坐骨神經(jīng)NFP的表達(dá)明顯低于正常對照組大鼠(P<0.01)。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠坐骨神經(jīng)NFP的表達(dá)均明顯高于DPN模型組大鼠(P<0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1遠(yuǎn)志可降低:DPN大鼠BG,提高DPN大鼠尾部SNCV,改善DPN大鼠坐骨神經(jīng)形態(tài)結(jié)構(gòu)的病理變化,并預(yù)防DM大鼠尾部SNCV的下降,延緩DM大鼠坐骨神經(jīng)形態(tài)結(jié)構(gòu)的損傷。
　　 2遠(yuǎn)志可減弱DPN大鼠坐骨神經(jīng)AR活性,

10、上調(diào)DPN大鼠坐骨神經(jīng)NFP的表達(dá),并預(yù)防DM大鼠坐骨神經(jīng)AR活性的增強(qiáng)和NFP表達(dá)的下調(diào)。
　　 3遠(yuǎn)志對DPN大鼠坐骨神經(jīng)損傷具有預(yù)防和保護(hù)作用。
　　 第二部分遠(yuǎn)志對DPN大鼠坐骨神經(jīng)相關(guān)神經(jīng)元胞體的保護(hù)作用
　　 目的:
　　 本研究采用腹腔注射STZ建立DPN大鼠模型,通過觀察大鼠背根節(jié)神經(jīng)元和脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元胞體形態(tài)結(jié)構(gòu)和神經(jīng)生長因子(nervegrowth factor,NGF)蛋白表達(dá)的

11、變化,研究遠(yuǎn)志對DPN大鼠坐骨神經(jīng)相關(guān)神經(jīng)元胞體的保護(hù)作用,為預(yù)防和治療DPN提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 雄性Wistar大鼠48只,隨機(jī)分為4組:正常對照組、DPN模型組、遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組,每組12只。DPN模型組、遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠均建立STZ致DM模型。待DM模型建立后,遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠給予遠(yuǎn)志(2.7g生藥／kg／d)灌胃6周；DPN模型組和遠(yuǎn)志治療組大鼠以尾部SNCV<30m／s為

12、標(biāo)準(zhǔn)建立DPN模型。DPN模型建立后,遠(yuǎn)志治療組大鼠給予同等劑量遠(yuǎn)志灌胃6周。
　　 光鏡、電鏡下觀察大鼠背根節(jié)神經(jīng)元和脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元胞體的形態(tài)結(jié)構(gòu),免疫組織化學(xué)方法觀察大鼠背根節(jié)神經(jīng)元和脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元NGF蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1各組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元胞體的形態(tài)結(jié)構(gòu)
　　 光鏡下正常對照組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元胞體結(jié)構(gòu)完整,體積飽滿,胞核呈圓形居胞體正中,尼氏體呈顆粒狀。DPN模型組大鼠背根

13、節(jié)神經(jīng)元胞體體積明顯縮小,神經(jīng)元池明顯增寬,尼氏體溶解,部分神經(jīng)元胞體變性,胞核溶解、消失。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠背根節(jié)大部分神經(jīng)元胞體的形態(tài)結(jié)構(gòu)接近正常形態(tài),均明顯好于DPN模型組大鼠。
　　 電鏡下DPN模型組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元胞漿內(nèi)線粒體高度腫脹,呈空泡樣變性,溶酶體明顯增多；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)斷裂,核糖體游離在胞漿中；核膜多處凹陷、皺褶,染色質(zhì)邊集；變性嚴(yán)重的神經(jīng)元胞核固縮、明顯移位且核膜溶解界限不清；胞漿內(nèi)可見核碎片及大量電

14、子密度較高的致密團(tuán)塊。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元胞體的超微結(jié)構(gòu)均明顯好于DPN模型組大鼠。
　　 2各組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元NGF蛋白的表達(dá)
　　 NGF蛋白免疫陽性產(chǎn)物為棕黃色細(xì)膩顆粒,位于背根節(jié)神經(jīng)元胞漿和胞核,以胞漿為主。DPN模型組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元NGF蛋白的表達(dá)明顯低于正常對照組大鼠(P<0.01)。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元NGF蛋白的表達(dá)均明顯高于DPN模型組大鼠(P<0.01)。

15、>　　 3各組大鼠脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元胞體的形態(tài)結(jié)構(gòu)
　　 光鏡下正常對照組大鼠脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元胞體形態(tài)完整,突起清晰可見,尼氏體呈斑塊狀。DPN模型組大鼠脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元胞體體積縮小,神經(jīng)元池增寬,尼氏體未見明顯變化。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元胞體的形態(tài)結(jié)構(gòu)基本接近正常形態(tài)。
　　 電鏡下DPN模型組大鼠脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元胞體的超微結(jié)構(gòu)未見明顯變化,個別神經(jīng)元尼氏體溶解。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠

16、脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元胞體的超微結(jié)構(gòu)未見明顯變化。
　　 4各組大鼠脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元NGF蛋白的表達(dá)
　　 NGF蛋白免疫陽性產(chǎn)物為棕黃色細(xì)膩顆粒,位于脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元胞漿和胞核,以胞漿為主。DPN模型組大鼠脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元NGF蛋白的表達(dá)明顯低于正常對照組大鼠(P<0.01)。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元NGF蛋白的表達(dá)均明顯高于DPN模型組大鼠(P<0.01)。
　　 結(jié)論: