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![帶有HPV-16 E6-E7基因的DC疫苗對裸鼠宮頸癌的抗腫瘤作用及相關機制的研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/19/12/c85d5ff8-abd2-4c4a-ba0a-afa354465409/c85d5ff8-abd2-4c4a-ba0a-afa3544654091.gif)
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文檔簡介
1、目的:觀察由攜帶HPV-16 E6/E7基因的樹突狀細胞(Dendritic cell,DC)疫苗免疫得到的細胞毒性T淋巴細胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)在裸鼠體內(nèi)對宮頸癌的抑制作用及相關機制的研究。
方法:體外誘導培養(yǎng)C57BL/6小鼠骨髓的未成熟DC(Immature DC,imDC),將已經(jīng)成功構建的攜帶人乳頭狀瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)-16 E6/E7基因的
2、重組腺病毒感染imDC,Western blot檢測E7蛋白的表達;構建裸鼠的人宮頸癌CaSki細胞移植瘤模型,應用DC疫苗誘導的BALB/c小鼠脾臟的CTL(Cytotoxic T lymphocytes)處理后,觀察裸鼠腫瘤體積變化,腫瘤長出第28 d后處死裸鼠,小心剝下腫瘤組織,石蠟包埋,HE染色觀察各組腫瘤的細胞形態(tài),免疫組織化學技術法檢測腫瘤組織中Bcl-2、Bax蛋白的表達情況。CCK8(Cell counting kit8
3、)法檢測經(jīng)DC疫苗免疫的BALB/c小鼠脾臟T淋巴細胞的增殖;免疫組化法檢測裸鼠脾臟組織CD4+T淋巴細胞的表達。
結果:成功培養(yǎng)出DC并制備出DC疫苗;第28d各組裸鼠腫瘤體積pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki組與對照組pAd-mock-DC-CTL-CaSki組、DC-CTL-CaSki組、CaSki組相比較,pAd-E6E7-DC-CTL-C aSki組裸鼠腫瘤體積最?。≒<0.05);免疫組化檢測腫瘤組織中Ba
4、x蛋白的表達結果顯示:pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki組最高,而對照組CaSki組表達最低;免疫組化檢測腫瘤組織中Bcl-2蛋白的表達結果顯示:pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki組最低,而對照組CaSki組表達最高。CCK8法檢測經(jīng)DC疫苗免疫的BALB/c小鼠脾臟T淋巴細胞的增殖,結果表明:pAd-E6/E7-DC組淋巴細胞OD值明顯高于pAd-mock-DC組、DC組和PBS組(P<0.01);免疫組化檢測各組裸鼠
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