1、目的：找出銅綠假單胞菌野生型PA01與黏液型PD0300菌株、PA01lasI rhlI基因缺陷型菌株、PA01 lasR rhlR基因缺陷型菌株之間的差異蛋白質(zhì)，探討這些蛋白質(zhì)與銅綠假單胞菌生物膜形成的關(guān)系。 方法： (1)將同一份樣品配制成不同蛋白濃度的標(biāo)本分別上樣檢測，對(duì)檢測所得蛋白質(zhì)圖譜進(jìn)行分析。(2)根據(jù)最佳檢測蛋白濃度，將黏液型PD0300、野生型PA01、PA01 lasIrhlI基因缺陷型和PA01 lasR r

2、hlR基因缺陷型菌株的菌體蛋白分別采用CM10、IMAC3-Cu這兩種蛋白質(zhì)芯片，運(yùn)用SELDI技術(shù)進(jìn)行測定，篩選最佳蛋白質(zhì)芯片。(3)利用SELDI技術(shù)對(duì)黏液型PD0300、野生型PA01、PA01 lasIrhlI基因缺陷型和PA01 lasR rhlR基因缺陷型菌株的菌體蛋白分別進(jìn)行檢測，并采用Biomarker Wizard軟件進(jìn)行分析。 結(jié)果：(1)檢測蛋白濃度為1.5gg/μl時(shí)，進(jìn)行SELDI檢測可發(fā)現(xiàn)較多的蛋白峰

3、。(2)同樣檢測蛋白濃度時(shí)，CM10芯片捕獲的蛋白峰數(shù)量比IMAC3-Cu芯片多。(3)銅綠假單胞菌野生型PA01與黏液型PD0300菌株的菌體蛋白比較，有16個(gè)蛋白峰存在差異(P<0.01)。與野生型PA01菌株相比，PD0300菌株中有10個(gè)蛋白質(zhì)高表達(dá)，分子量分別為4，074Da、3，817Da、8，923Da、8，148Da、3，332Da、4，521Da、7，621Da、11，594Da、7，83iDa和13，75IDa；有6

4、個(gè)蛋白質(zhì)低表達(dá)，分子量分別為6，199Da、6，899Da、12，379Da、6，11 5Da、6，763Da和8，576Da。(4)銅綠假單胞菌PA01 lasI rhlI基因缺陷型與野生型PA01菌株相比有1個(gè)蛋白質(zhì)低表達(dá)(P<0.05)，分子量為6，910Da。(5)銅綠假單胞菌PA01 lasR rhlR基因缺陷型與野生型PA01菌株之間有4個(gè)蛋白峰存在差異(P<0.05)。在PA01 lasR rhlR基因缺陷型菌株中有2個(gè)蛋

5、白質(zhì)高表達(dá)，分子量分別為8,924Da和8,790Da；有2個(gè)蛋白質(zhì)低表達(dá)，分子量分別為6,735Da和6,986Da。 結(jié)論： (1)運(yùn)用SELDI技術(shù)對(duì)細(xì)菌菌體蛋白進(jìn)行分析的最佳檢測蛋白濃度為1.5μg／μl。 (2)與IMAC3-Cu芯片相比，CM10芯片更適于細(xì)菌菌體蛋白質(zhì)組學(xué)的研究。 (3)銅綠假單胞菌野生型PA01與黏液型PD0300的菌體蛋白有16個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)明顯不同，這些差異蛋白可能與銅綠