逆轉錄病毒載體介導Fcy--Fur融合基因聯(lián)合5-FC對人卵巢癌細胞株HO-8910殺傷作用的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究融合型自殺基因Fcy::Fur聯(lián)合5-FC對卵巢癌細胞株HO-8910的殺傷效果.方法:1.根據(jù)逆轉錄病毒表達載體pLXSN和LZRSpBMN-Z的多克隆位點及質(zhì)粒pORF5-Fcy::Fur上Fcy::Fur的基因序列,設計兩對PCR引物,在引物的5'端分別引入EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位點,采用常規(guī)PCR從pORF5-Fcy::Fur中擴增出Fcy::Fur融合基因,經(jīng)核酸序列測定正確后,分別克隆進pLXSN和LZRS

2、pBMN-Z.經(jīng)雙酶切鑒定后,分別轉染包裝細胞PT67和Pheonix,擴大培養(yǎng)陽性克隆并收集上清,獲得重組逆轉錄病毒.2.重組病毒感染靶細胞HO-8910,分別以G418和嘌呤霉素篩選得到穩(wěn)定表達Fcy::Fur的陽性細胞株(命名為HO-8910-Fcy::Fur),并經(jīng)抽提細胞基因組DNA和RNA分別進行PCR和RT-PCR等鑒定目的基因的整合與表達.3.在HO-8910-Fcy::Fur中加入前藥5-FC,MTT法測定腫瘤細胞殺傷

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