1、在成年動物睪丸中,生理性的細(xì)胞凋亡在精子生成過程的各個(gè)時(shí)期都有發(fā)生,然而異常的生殖細(xì)胞凋亡則會導(dǎo)致雄性不育。各種外界因素如輻射、激素、化學(xué)藥物等作用于睪丸,會使得細(xì)胞凋亡增加進(jìn)而導(dǎo)致病理性的生殖細(xì)胞缺失。事實(shí)上,環(huán)境中的毒物和化學(xué)藥物對生殖系統(tǒng)的影響已成為目前青年人精子缺乏的一個(gè)重要原因,并且人們采用放射療法和化學(xué)療法治療癌癥也會誘導(dǎo)生殖細(xì)胞凋亡進(jìn)而導(dǎo)致不育。因此,研究睪丸生殖細(xì)胞凋亡機(jī)制,進(jìn)一步探索促進(jìn)成年個(gè)體生殖細(xì)胞存活的途徑和方法

2、已成為當(dāng)務(wù)之急。本實(shí)驗(yàn)研究輸精管結(jié)扎(1～9天)對大鼠睪丸功能的影響,以及生殖細(xì)胞的凋亡是否與FasL/Fas系統(tǒng)有關(guān),分析生殖細(xì)胞凋亡的途徑,進(jìn)而初步探討睪丸生殖細(xì)胞凋亡機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠輸精管結(jié)扎模型,設(shè)立正常對照組、假手術(shù)組、手術(shù)處理組。于手術(shù)后3天、5天、7天、9天分別采用睪丸指數(shù)、組織學(xué)觀察、脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP的缺口末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)對睪丸的功能、曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)及生殖細(xì)胞凋亡狀態(tài)進(jìn)行觀察；

3、同時(shí),采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitive PCR)對FasL/Fas的mRNA水平進(jìn)行檢測。 檢測結(jié)果顯示：1)輸精管結(jié)扎各組與對照組相比(包括相應(yīng)假手術(shù)組及未處理組),睪丸指數(shù)沒有明顯變化；組織形態(tài)學(xué)顯示,手術(shù)后第5天輸精管結(jié)扎組的睪丸出現(xiàn)曲細(xì)精管的生精上皮內(nèi)有零星的空泡,在鄰近基底膜處的精母細(xì)胞有不同程度的脫落,管腔內(nèi)的成熟精子數(shù)量有明顯的減少,這一現(xiàn)象在手術(shù)處理后第7天更為明顯。2)TUNEL

4、染色顯示,輸精管結(jié)扎3天、5天、7天、9天的各組睪丸均可見大量的細(xì)胞凋亡,主要是位于基底部的初級精母細(xì)胞。生殖細(xì)胞凋亡隨著輸精管結(jié)扎時(shí)間的延長而加強(qiáng),在第7天達(dá)到凋亡高峰,隨后有所下降。3)實(shí)時(shí)熒光定量PCR顯示,輸精管結(jié)扎組與相應(yīng)假手術(shù)組相比,FasL/Fas的mRNA水平未見顯著變化。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,輸精管結(jié)扎(1～9天)引起睪丸生殖細(xì)胞大量凋亡,生殖細(xì)胞凋亡的途徑機(jī)制似乎與FasL/Fas分子無關(guān),至于具體的途徑和機(jī)制調(diào)控