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![生脈注射液對SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞表達多種造血相關因子的干預研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/19/12/ed5d3846-074a-4211-a788-84f4c61622ad/ed5d3846-074a-4211-a788-84f4c61622ad1.gif)
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文檔簡介
1、目的:通過體外分離、培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)來鑒定其生物學特性,為進一步研究及實際臨床應用提供實驗基礎;探討生脈注射液對SD大鼠BMSCs增殖的影響,及生脈注射液對其分泌造血相關因子的影響,從而為生脈注射液在臨床血液病中的應用提供有力的實驗依據(jù)。
方法:取SD大鼠股骨、脛骨骨髓,采用全骨髓貼壁分離篩選方法培養(yǎng)BMSCs,在顯微鏡下觀察骨髓間充質(zhì)干細胞的細胞形態(tài)學特點,并通過流式細胞儀技術鑒定BMSCs的生
2、物學特性。用四氮哇藍比色法(MTT比色法)檢測生脈注射液對BMSCs增殖的影響,Real Time-PCR方法檢測造血相關因子的表達及生脈注射液對造血相關因子表達的影響。
結(jié)果:BMSCs在接種12~24小時后,大部分細胞能貼壁,隨時間延長,可見細胞出現(xiàn)集落式生長,呈現(xiàn)成纖維細胞樣,流式細胞儀鑒定BMSCs表面標志CD29陽性率為96.57%、CD44陽性率為93.63%,CD34陽性率為3.6%,CD45陽性率為12.3
3、%。有粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、血小板生成素(TPO)、干細胞因子(SCF)表達;加入不同濃度的生脈注射液與BMSCs共同培養(yǎng)24h、48h、72h后,MTT比色法檢測結(jié)果顯示:以含5μL/ml濃度的生脈注射液組48h增殖作用最明顯(P<0.05),證明含5μL/ml濃度的生脈注射液的培養(yǎng)液最適宜BMSCs增殖;RealTime-PCR分析顯示BMSCs可分泌GM-CSF、SCF、TPO,且GM-CSF、SCF的mR
4、NA表達量顯著高于對照組(P<0.05),TPO的mRNA表達量與對照組相比明顯下降,且以第九代下降最明顯,差異有顯著性(P<0.05)。
結(jié)論:
1、通過全骨髓貼壁分離篩選培養(yǎng)法可成功地從SD大鼠骨髓中分離到骨髓間充質(zhì)干細胞,并能檢測出可表達多種造血相關因子。
2、生脈注射液能促進BMSCs體外增殖,并可以促進BMSCs分泌GM-CSF、SCF,這可能揭示了骨髓間充質(zhì)干細胞促進造血的部分作用機
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