1、豬瘟(classicalswinefever，CSF)是由豬瘟病毒(classicalswinefevervirus，CSFV)引起豬的一種以稽留高熱、出血、梗死、壞死和高死亡率為主要特征的高度接觸性傳染病。CSFV屬于黃病毒科、瘟病毒屬，該屬還有牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)和綿羊邊界病病毒(BDV)。CSFV是一種單股正鏈RNA病毒，基因組長約為12.3kb，含有唯一的開放閱讀框架，編碼4種結(jié)構(gòu)蛋白(C、E1、E2和Erns)和7種非

2、結(jié)構(gòu)蛋白(Npro、p7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)。CSFV只有一個血清型，可分為3個基因群和10個基因亞群，有研究認為基于NS5B基因的分類是最可靠的。 本文旨在建立一種能區(qū)分CSFV強毒和弱毒的反轉(zhuǎn)錄-復合套式聚合酶鏈式反應(RT-nPCR)檢測方法。根據(jù)GenBank上登錄的所有CSFV基因組全序列，選擇保守區(qū)設計了一對CSFV通用引物，并在該對引物跨越區(qū)域的內(nèi)部設計了豬瘟兔化弱毒疫苗和強毒特異

3、性引物，建立了一種能區(qū)分豬瘟強毒和弱毒的RT-nPCR鑒別診斷方法。首先用PK-15細胞對豬瘟病毒Shimen株、HCLV株和15份黑龍江省采集的疑似豬瘟病料進行了病毒分離與繁殖，應用該方法從豬瘟兔化弱毒疫苗和Sbimen強毒株基因組中擴增出了大小分別為447bp和343bp的一條特異性片段，從兩種病毒基因組混合物中擴增出了大小為447bp和343bp的兩條特異性片段，但對牛病毒性腹瀉病毒和其它常見豬源病毒細胞培養(yǎng)物以及正常細胞基因組進

4、行檢測時均為陰性。該方法可以檢測出0.04pg的CSFVRNA。并利用該方法對人工感染的5頭豬全血中的病毒進行了檢測，檢出時間早，對人工感染豬最早可于感染后2天檢出；檢測耗時短，最快可在6小時內(nèi)完成。對從黑龍江省、河南、吉林和其他地區(qū)采集的共41份疑似豬瘟病料進行了檢測，結(jié)果表明，有27份類似豬瘟強毒，1份類似弱毒疫苗。限制性片段長度多態(tài)性和種系發(fā)生分析證實了RT-nPCR的檢測結(jié)果。本研究建立的RT-nPCR可以有效區(qū)分豬瘟強毒和弱毒