1、研究背景: 神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)是指具有分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力，能自我更新并能提供大量腦組織細(xì)胞的細(xì)胞群。神經(jīng)干細(xì)胞具有以下兩個(gè)基本特性：自我復(fù)制能力；多向分化潛能。神經(jīng)干細(xì)胞不僅能促進(jìn)神經(jīng)元的再生和腦組織的修復(fù)，而且通過(guò)基因修飾還可用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的基因治療，表達(dá)外源性的神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及代謝性酶，為許多難以治療的神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供了新的治療途徑。雖然這類細(xì)胞終

2、身存在，但由于絕對(duì)數(shù)量和局部微環(huán)境的限制，使損傷神經(jīng)組織自我修復(fù)作用微乎其微。采用外源性的神經(jīng)干細(xì)胞移植己被認(rèn)為是治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病最具前景的治療方法之一。 過(guò)氧化物酶體增殖劑激活受體(peroxisome proliferation-activated receptors，PPARs)具有多種生物效應(yīng)，可促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化和脂肪生成，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性，調(diào)解體內(nèi)糖平衡，抑制炎癥因子生成及炎癥反應(yīng)，影響腫瘤生長(zhǎng)，對(duì)心血管產(chǎn)生保

3、護(hù)效應(yīng)。近年來(lái)的研究表明，PPARs還具有神經(jīng)保護(hù)作用，可以減輕阿爾采末病、帕金森病、腦缺血及多發(fā)性硬化等神經(jīng)退行性疾病中神經(jīng)細(xì)胞的損傷。因此，PPARs的研究將極有可能為這些疾病的治療另辟蹊徑。 方法: 本研究采用無(wú)血清培養(yǎng)液，給予生長(zhǎng)因子bFGF和EGF，利用神經(jīng)干細(xì)胞具有自我更新和增殖能力的特性，從新生大鼠的大腦皮層、室管膜下區(qū)和海馬等部位分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞。采用細(xì)胞免疫熒光標(biāo)記法、western blot和RT-

4、PCR分別檢測(cè)PPARα/PPARβ蛋白或mRNA在神經(jīng)干細(xì)胞不同階段的表達(dá)水平。 結(jié)果: 1.免疫熒光定位顯示，PPARα/PPARβ蛋白被染成綠色，在神經(jīng)干細(xì)胞上均可見(jiàn)。熒光主要位于細(xì)胞核內(nèi)，細(xì)胞質(zhì)中也有少許，說(shuō)明它們均主要在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)。 2.Western blot示，經(jīng)PPARα/PPARβ抗體分別孵育后出現(xiàn)的強(qiáng)陽(yáng)性蛋白印跡條帶也證實(shí)了PPARα/PPARβ在神經(jīng)干細(xì)胞上的表達(dá)。并且隨誘導(dǎo)分化時(shí)間延長(zhǎng)，

5、PPARβ表達(dá)量逐漸降低，蛋白條帶變淺；而PPARα表達(dá)量變化不明顯。 3.RT-PCR示，在未分化及已分化的神經(jīng)干細(xì)胞中均存在有PPARα和PPARβ的mRNA。同western blot結(jié)果的趨勢(shì)一致，PPARβ在神經(jīng)干細(xì)胞分化后顯著減少；而PPARα mRNA在神經(jīng)干細(xì)胞分化的過(guò)程中變化不大。 結(jié)論: 神經(jīng)干細(xì)胞是能自我更新和具有多種潛能的母系神經(jīng)細(xì)胞。它的成功分離和體外培養(yǎng)對(duì)通過(guò)細(xì)胞移植治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾