1、目的：了解我院臨床分離的銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)對8種常用抗假單胞菌藥物的耐藥性；了解外排泵抑制劑Carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone(CCCP)與Phe-Arg-β-naphthylamide(PAβN)對耐亞胺培南和美羅培南銅綠假單胞菌菌株體外敏感性的影響：探索臨床銅綠假單胞菌菌株對亞胺培南和美羅培南耐藥性差異及其與外排泵表達(dá)水平及膜孔蛋白Opr

2、D2變化之間的關(guān)系。 方法：對四川大學(xué)華西醫(yī)院2005年1月～2005年7月從臨床分離到的142株非重復(fù)Pa按NCCLS(National Committee for Clinical Laboratory Standards)推薦的瓊脂對倍稀釋法測定亞胺培南(IMP)、美羅培南(MEP)、哌拉西林／他唑巴坦、頭孢哌酮／舒巴坦、頭孢他定、氨曲南、環(huán)丙沙星及阿米卡星8種常用抗假單胞菌藥物的最低抑菌濃度(minimal inhibi

3、tory concentration，MIC)；選用對亞胺培南耐藥的107株P(guān)a進(jìn)行泵抑制劑CCCP和PApN的抑制試驗，觀察亞胺培南和美羅培南的敏感性變化；對篩選出來的32株對亞胺培南和美羅培南不同耐藥表型的Pa，采用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)法，檢測外膜蛋白OprD2相對含量，采用實時熒光定量PCR(Real TimeFluorescent Quantitative PCR)法，檢測三種外排泵基因的表達(dá)量

4、，分析 不同耐藥表型的Pa耐藥機(jī)制上的差異。 結(jié)果：142株P(guān)a中主要來自ICU(31.69％)和呼吸科(11.97％)： 絕大部分為痰標(biāo)本(88.73％)。耐藥率最高的是亞胺培南(54.23％)，其 次是環(huán)丙沙星(45.07％)：敏感率最高的是哌拉西林／他唑巴坦(85.92％)． 其次為阿米卡星(81.69％)。對β內(nèi)酰胺類抗生素交叉耐藥率高達(dá)40.84 ％(58／142)，多重耐藥的菌株有38.73％(55／142

5、)。使用外排泵抑制劑 后，亞胺培南耐藥率僅有輕度下降，美羅培南耐藥率由71.96％降至65.42 ％(聯(lián)合CCCP)與63.38％(聯(lián)合PAβN)，MIC值沒有變化的菌株占 50％以上；IMP聯(lián)合PAl3N后MIC降至原MIC值1／2的菌株占11.27％、 降至原MIC值1／4的菌株占2.82％；IMP聯(lián)合CCCP后MIC降至原MIC 值1／2的菌株占41.12％、降至原MIC值1／4的菌株占4.67％；MEP聯(lián)合 PAIB

6、N后MIC降至原MIC值1／2的菌株占22.54％、降至原MIC值1／4 的菌株占1.41％；MEP聯(lián)合CCCP后MIC降至原MIC值1／2的菌株占 25.23％、降至原MIC值1／4的菌株占1.87％。提取所選32株P(guān)a的外膜 蛋白并電泳，結(jié)果顯示OprD2相對含量在耐藥組為0.00％～3.5％(其中 有一株為8.70％)，敏感組為6.20％～10.20％，統(tǒng)計顯示：碳青霉烯類耐 藥組明顯低于敏感組。設(shè)定銅綠假單胞菌ATCC

7、27853外排泵表達(dá)量為1， 4株敏感株mexA表達(dá)量介于0.0003～0.99，mexD表達(dá)量介于0.0001～ 1.11，mexF表達(dá)量介于0.013～0.31；10株IMP耐藥、MEP敏感株mexA 表達(dá)量介于0.28～4.48，mexD表達(dá)量介于0.37～20.06，mexF表達(dá)量介 于0.44～5.56：17株IMP、MEP均耐藥株mexA表達(dá)量介于1.42～138.25， mexD表達(dá)量介于0.1～16.66，me

8、xF表達(dá)量介于0.22～12.61。在27株 碳青霉烯類耐藥菌株中88.89％存在外排泵高表達(dá)。統(tǒng)計顯示：三種外排 泵基因表達(dá)水平在碳青霉烯類抗生素耐藥組高于敏感組。 結(jié)論：銅綠假單胞菌耐藥菌株常見，且常呈多重耐藥和交叉耐藥。亞胺培南、美羅培南耐藥率均較高，亞胺培南耐藥率高于美羅培南，亞胺培南、美羅培南不宜作為我院治療Pa的經(jīng)驗性選用藥物。膜孔蛋白OprD2減少或缺失是我院Pa對亞胺培南耐藥的主要原因之一，但在美羅培南耐藥中

9、所起的作用有待進(jìn)一步研究。外排泵抑制劑在Pa中對碳青霉烯類抗生素的抗菌活性影響較小，外排泵表達(dá)水平和泵抑制劑對：MIC影響沒有明顯的相關(guān)性。外排泵高表達(dá)是本院Pa對碳青霉烯類抗生素耐藥的主要原因。一株菌同時存在多種外排泵高表達(dá)的現(xiàn)象十分常見。對亞胺培南、美羅培南均耐藥的Pa組的MexAB-OprM表達(dá)水平高于亞胺培南耐藥、美羅培南敏感組，說明MexAB-OprM的高表達(dá)在亞胺培南、美羅培南耐藥性差異上發(fā)揮重要作用。MexCD-OprJ、