1、香菇多糖系從香菇子實(shí)體中提取純化而得到的高分子葡聚糖,是一種宿主免疫增強(qiáng)劑,具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)和刺激干擾素形成等功能。目前研究較多的為堿提高分子量香菇多糖,水提香菇多糖的研究較為少見。本課題以香菇子實(shí)體為原料,采用水提醇沉、過氧化氫脫色和超濾法分級(jí)分離得到三種均一分子量水溶性精制香菇多糖組分,分別命名為 LTP1、LTP2和LTP3,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究其化學(xué)結(jié)構(gòu)、糖鏈構(gòu)象及體內(nèi)外抗腫瘤活性。
　　文章從以下三部分就水

2、溶性香菇多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)分析及體內(nèi)外抗腫瘤活性研究進(jìn)行了綜述。
　　第一部分水溶性香菇多糖的提取、分離和純化
　　以房縣小花菇為原料,采用熱水提取、乙醇沉淀法從香菇子實(shí)體中提取香菇粗多糖,經(jīng)過過氧化氫脫色和超濾法分級(jí)分離得到三種水溶性精制香菇多糖組分;通過對(duì)各組分進(jìn)行糖含量測(cè)定、相對(duì)分子質(zhì)量檢測(cè)、碘-碘化鉀試驗(yàn)及紫外掃描鑒定其純度;通過元素分析、比旋光度測(cè)定和糖類物質(zhì)定性鑒別試驗(yàn)分析其理化性質(zhì)。經(jīng)分離純化得到三種精制香菇

3、多糖組分LTP1、LTP2和LTP3,苯酚-硫酸法測(cè)得糖含量分別為98.86％、100.73％和99.03％,高效凝膠色譜法測(cè)得相對(duì)分子質(zhì)量分別為6.621×105 Da、3.062×105 Da和9.055×104 Da,碘-碘化鉀試驗(yàn)及紫外掃描圖譜顯示各組分均不含淀粉、蛋白質(zhì)和核酸;元素分析顯示C:H:O≈1:2:1,比旋光度([α]20D)分別為+46.278、-6.330、-5.500,定性鑒別試驗(yàn)說明三者均為糖類物質(zhì),且不含還

4、原糖。因此,本課題制得的水溶性精制香菇多糖LTP1、LTP2和LTP3為分子量均一、高純度的多糖組分。
　　第二部分水溶性香菇多糖的結(jié)構(gòu)分析
　　采用完全酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化分析等化學(xué)方法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、傅立葉紅外光譜法及核磁共振波譜技術(shù)等波譜學(xué)方法綜合分析LTP1、LTP2和LTP3的一級(jí)結(jié)構(gòu),采用剛果紅實(shí)驗(yàn)對(duì)其糖鏈構(gòu)象進(jìn)行初步研究。完全酸水解結(jié)果顯示三者均由D-葡萄糖組成;綜合分析高碘酸氧

5、化、Smith降解和甲基化結(jié)果可知,LTP1、LTP2和LTP3的糖殘基連接類型均包括末端、(1-3)、(1-4)、(1-6)和(1-3-6)連接,其中,(1-4)連接類型含量很少,末端、(1-3)、(1-6)和(1-3-6)連接的摩爾比分別近似于1:2:1:2、1:2:2:2、1:1:5:1;核磁共振波譜顯示LTP1、LTP2和LTP3的水解產(chǎn)物L(fēng)TP1-p、LTP2-p和LTP3-p可能分別含有六種、七種、八種類型的糖殘基;紅外光譜

6、顯示 LTP1、LTP2和LTP3均為多糖類物質(zhì),LTP1含有α和β兩種構(gòu)型的糖苷鍵,以α構(gòu)型為主,而LTP2和LTP3均只含有β構(gòu)型的糖苷鍵,三者均為D-吡喃葡萄糖環(huán)結(jié)構(gòu);剛果紅實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明LTP1具有三股螺旋構(gòu)象,LTP2和LTP3的空間構(gòu)象有待于進(jìn)一步研究。
　　第三部分水溶性香菇多糖的體內(nèi)外抗腫瘤活性研究
　　以體外培養(yǎng)法分別探討LTP1、LTP2和LTP3對(duì)小鼠肝癌細(xì)胞H22、小鼠肉瘤細(xì)胞S180、人乳腺癌細(xì)胞MC

7、F-7及人白血病細(xì)胞K562增殖的抑制作用,采用MTT比色法檢測(cè)其抑制率;以 S180荷瘤小鼠為模型進(jìn)行體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn),探討精制香菇多糖LTP1的體內(nèi)抑瘤作用及其對(duì)免疫器官的影響。結(jié)果顯示LTP1和LTP2對(duì)H22、S180、MCF-7和K562細(xì)胞體外增殖均具有抑制作用,但對(duì)K562的抑制作用較弱,LTP3僅對(duì)H22和S180細(xì)胞體外增殖有抑制作用,三個(gè)組分的體外抗腫瘤活性總體呈劑量依賴性,且LTP1的活性明顯高于LTP2和LTP3;