1、本研究取健康奶牛瘤胃液，按照厭氧菌分離步驟和鑒別程序，通過丙酸生成菌株的特異性培養(yǎng)基CDC血瓊脂平板及普通LB瓊脂平板，共篩選出10株瘤胃丙酸生成厭氧菌，選取其中1株K6分析其生物化學(xué)反應(yīng)特性。根據(jù)GenBank中反芻月形單胞菌(M62730)的序列設(shè)計引物，從其基因組DNA中克隆出16SrRNA基因，經(jīng)過序列測定，將所得序列經(jīng)BLAST與GenBank數(shù)據(jù)庫中已報道的序列進(jìn)行同源性分析，結(jié)果顯示所獲得序列與已報道的反芻月形單胞菌序列的

2、同源性達(dá)到98％，結(jié)合形態(tài)學(xué)和生化反應(yīng)的檢測結(jié)果，證實K6為月形單胞菌屬反芻月形單胞菌。 取12只健康小尾寒羊進(jìn)行瘤胃瘺管手術(shù)后平均分成兩組，每組6只。將反芻月形單胞菌原始菌(K6)與本實驗室構(gòu)建的轉(zhuǎn)座基因工程菌(TnK6)通過瘤胃瘺管注入瘤胃內(nèi)，測定0h～144h內(nèi)瘤胃液的pH值、乳酸和揮發(fā)性脂肪酸(VFA)的濃度。結(jié)果表明：在0h～144h內(nèi)，兩組間乳酸濃度、丙酸濃度和丁酸濃度差異均不顯著(p＞005)，TnK6組pH、乙酸