1、[研究背景]
　　 子宮是胚胎生長和發(fā)育的部位。巨噬細胞(macrophage，M￠)來源于血液中的單核細胞，是子宮的一種常駐免疫細胞，參與子宮局部免疫應(yīng)答、免疫效應(yīng)與免疫調(diào)節(jié)，對哺乳動物生殖功能，尤其是妊娠的建立和維持有著重要的作用。國內(nèi)外學(xué)者對人和嚙齒類動物正常月經(jīng)周期/動情周期、妊娠期子宮巨噬細胞的密度和時空分布方式、遷移、分化及激活的調(diào)控及其分泌功能的探討均提示巨噬細胞的功能和分布可能直接或間接的受到卵巢甾體性激素——雌

2、孕激素的調(diào)控。雌、孕酮是妊娠建立和維持過程中起重要作用的激素。雌激素可使子宮內(nèi)膜增生增厚，有助于提高子宮內(nèi)膜對植入的敏感性，是啟動胚胎著床的重要條件。孕酮在非妊娠期間由黃體細胞分泌，可使處于增生期的子宮內(nèi)膜轉(zhuǎn)化為分泌期，為受精卵的生存和著床提供適宜的環(huán)境。子宮內(nèi)膜達到容受狀態(tài)是成功妊娠的關(guān)鍵因素之一，此時子宮內(nèi)膜結(jié)構(gòu)、細胞組成及基因的表達等在雌孕激素的調(diào)節(jié)下均發(fā)生改變并且在時間和空間上達到高度的協(xié)調(diào)一致。目前，大量臨床研究報道在體外受精

3、-胚胎移植周期(IVF-ET)中過高的雌激素水平及孕激素水平對子宮內(nèi)膜容受性產(chǎn)生影響，降低臨床妊娠率。而圍著床期子宮巨噬細胞數(shù)量和分布有著高度的時間和空間特異性，對子宮內(nèi)膜容受性有著重要影響，圍著床期巨噬細胞數(shù)量、活性及表型異常均可降低子宮內(nèi)膜容受性。目前國內(nèi)外關(guān)于雌、孕激素對子宮巨噬細胞的相關(guān)研究已有多項報道，但是研究的結(jié)果有所不同，其機制仍存在爭議。關(guān)于超生理水平及生理水平雌激素或孕激素對子宮巨噬細胞的影響國內(nèi)亦未見報道。因此本研究

4、采用雙側(cè)卵巢切除小鼠模型（去勢小鼠），外源性補充生理劑量及超生理劑量的雌激素或孕激素，研究雌、孕激素對子宮巨噬細胞數(shù)量、分布及功能的影響，并對其機制進行初步探討，從而為進一步了解巨噬細胞在生殖生理學(xué)、生殖免疫學(xué)的作用，為解決生殖醫(yī)學(xué)臨床上迫切需要解決的著床障礙、器官移植提供新思路，為尋找和開發(fā)主動干預(yù)的免疫學(xué)新途徑提供動物實驗理論依據(jù)。
　　 [目的]
　　 建立雙側(cè)卵巢切除小鼠模型，分別從組織和細胞水平上，研究外源性補

5、充不同濃度雌二醇和孕酮后小鼠子宮組織局部巨噬細胞的分布、數(shù)量和巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)表達量的變化，探討雌、孕激素對巨噬細胞數(shù)量和分布的影響及其可能的作用機制。
　　 [方法]
　　 取性發(fā)育成熟的雌鼠（體重30±2g）行雙側(cè)卵巢切除術(shù)（去勢小鼠），術(shù)后第17天分別皮下注射生理劑量雌二醇（100ng/只）、超生理劑量雌二醇(1000ng/只)、生理劑量孕酮（2mg/只）、超生理劑量孕酮（20mg/只）0.1ml

6、及芝麻油0.1ml（陰性對照組），未給予干預(yù)的去勢小鼠作為空白對照組。分別于給藥后6h、24h取子宮標本，利用 HE染色觀察組織形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的變化;利用免疫組織化學(xué)方法定量研究不同濃度雌二醇、孕酮作用后各時間點子宮巨噬細胞數(shù)量、分布和M-CSF表達量的變化。
　　 [結(jié)果]
　　 (1)小鼠子宮形態(tài)學(xué)觀察、陰道脫落細胞特征變化觀察以及外周血雌孕激素測定結(jié)果示小鼠去勢后子宮明顯萎縮、外陰及陰道脫落細胞失去周期性變化，呈動

7、情間期樣改變、血中雌孕激素水平較正常小鼠顯著降低。上述結(jié)果提示去勢小鼠模型成功建立。
　　 (2)免疫組織化學(xué)顯示:空白對照組及陰性對照組F4/80+巨噬細胞數(shù)量極少，僅在子宮內(nèi)膜基底部與肌膜交界處、肌膜和外膜零星可見;陰性對照組6h、24h子宮內(nèi)膜、肌膜及外膜巨噬細胞數(shù)量與空白對照組無顯著差異。與陰性對照組相比，外源性補充100ng、1000ng雌激素組給藥后6h、24h子宮巨噬細胞數(shù)較陰性組均顯著增加(P分別為0.000、0

8、.003)。100ng、1000ng雌激素組給藥后6h子宮巨噬細胞數(shù)與24h相比無顯著差異（P分別為0.499、0.225）。對子宮各層巨噬細胞數(shù)進行分析:補充100ng及1000ng雌激素后6h、24h，子宮巨噬細胞分布未發(fā)現(xiàn)顯著差異，即補充后6h子宮內(nèi)膜、肌膜、外膜巨噬細胞數(shù)與陰性組相比顯著增加;24h后子宮肌膜及外膜巨噬細胞與陰性對照組相比顯著增加，內(nèi)膜巨噬細胞無顯著差異。
　　 (3)免疫組織化學(xué)顯示:與陰性對照組相比，

9、外源性補充孕酮2 mg后24h子宮巨噬細胞顯著增加( P＝0.006)，6h后有增高趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＝0.123);補充20mg孕酮后6h子宮巨噬細胞顯著增加(P＝0.012)，24h后子宮巨噬細胞與陰性對照組無顯著差異(P＝0.129)。對子宮各層巨噬細胞數(shù)進行分析，補充2mg孕酮后6h，子宮內(nèi)膜、肌膜、外膜巨噬細胞數(shù)與陰性組無顯著差異;24h后子宮內(nèi)膜及肌膜巨噬細胞顯著增加。補充20mg孕酮后6h，子宮肌膜巨噬細胞數(shù)顯著

10、增加( P＝0.000)，其余各層與陰性對照組無顯著差異;24h后子宮各層較陰性對照組均無顯著差異。
　　 (4)免疫組織化學(xué)顯示:子宮內(nèi)膜腺上皮、腔上皮、血管內(nèi)皮、子宮肌層和外膜均可見M-CSF表達?？瞻讓φ战M及陰性對照組M-CSF表達量少，兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異。外源性補充100ng、1000ng雌激素后6h、24h，小鼠子宮M-CSF的表達較陰性對照組表達均顯著增強（P分別為0.001、0.008）。外源性補充100ng雌激素

11、后24h子宮M-CSF表達較給藥后6h表達量顯著增加(P＝0.044)。1000ng雌激素組6h與24h子宮M-CSF表達無顯著差異。對子宮各層M-CSF表達量進行分析，補充100ng、1000ng雌激素后6h及24h子宮內(nèi)膜、肌膜及外膜M-CSF表達較陰性對照組均顯著增高(P＝0.041);皮下注射100ng雌激素后6h、24h后子宮各層M-CSF表達與100ng雌激素組比較無顯著差異。
　　 (5)免疫組織化學(xué)顯示:外源性補

12、充孕激素2mg、20mg后6h子宮M-CSF表達較陰性對照組無顯著增高(P＝0.110);24h后兩個劑量組子宮M-CSF表達量均顯著增高(P＝0.001)。對子宮各層M-CSF表達量進行分析，補充2mg孕酮后6h子宮內(nèi)膜M-CSF表達較陰性對照組顯著增高(P＝0.041);24h后子宮各層M-CSF表達量較陰性對照組均顯著增高。補充20mg孕酮后6h子宮各層M-CSF表達均未見顯著增加，24h后子宮內(nèi)膜、肌膜、外膜M-CSF表達較陰性

13、對照組均顯著增加。皮下注射20mg后6h、24h后M-CSF表達與2mg組比較無顯著差異
　　 (6)生理劑量及超生理劑量雌激素或孕激素作用后，F(xiàn)4/80+巨噬細胞的數(shù)量與M-CSF表達量在整個子宮的變化趨勢基本一致，但小鼠子宮內(nèi)F4/80巨噬細胞數(shù)量和M-CSF表達量均無顯著相關(guān)（雌激素組:γ＝0.498，P＝0.152;孕激素組:γ＝-0.051，P＝0.889）。
　　 [結(jié)論]
　　 (1)生理及超生理劑