豬源趨化因子CXCL17的基因克隆與刺激表達研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、CXC趨化因子家族配基17(CXC Ligand17,CXCL17)是一個新發(fā)現(xiàn)的趨化因子,僅有10年歷史,目前主要關(guān)于人源和鼠源CXCL17的研究,豬源CXCL17相關(guān)研究尚未見報道。已有人源和鼠源CXCL17研究報道,它是一個多功能蛋白質(zhì),具有潛在的殺菌活性,抗炎活性,促進血管生成及抗凋亡活性。這些活性研究主要集中于單核-巨噬細胞及各種腫瘤細胞等,未涉及到腸道細胞。腸道的健康水平很大程度的影響了豬的養(yǎng)殖,豬源 CXCL17基因的克隆

2、及其在豬腸道中的表達研究,不僅為人們對CXCL17帶來更全面的認識,也將會為一些豬腸道疾病的研究帶來更新的了解,甚至給出更好的治療解決方案。
  本研究以人CXCL17基因核苷酸序列為模板,從豬的EST庫中篩選出一系列相似序列,利用軟件拼接后,預測到豬CXCL17基因序列,以豬肺組織總RNA經(jīng)RT-PCR擴增后的cDNA為模板再次擴增,得到了豬 CXCL17基因序列。對所得豬 CXCL17核苷酸序列及氨基酸序列進行生物信息學分析,

3、預測豬CXCL17是一個親水性小分子堿蛋白。另外,通過信號肽分析,預測其也是一個分泌性蛋白。此外,同源性及進化樹分析結(jié)果顯示它與人CXCL17具有較高的相似度及親緣性,因此,豬CXCL17在功能上應與人CXCL17極為接近。同時做組織分布研究,確定了豬CXCL17的結(jié)構(gòu)特性和分布特點,發(fā)現(xiàn)它在肺,胃部以及小腸中的分泌居多。接著構(gòu)建了豬CXCL17的原核表達載體pET28a-susCXCL17,以及真核表達載體pcDNA-susCXCL1

4、7,用于后續(xù)對豬CXCL17蛋白結(jié)構(gòu)和活性更深入的探索。
  另外本研究,對豬 CXCL17在腸道細胞中的表達做了研究。用多種細菌感染IPEC-J2細胞,發(fā)現(xiàn)IPEC-J2細胞受大腸桿菌等革蘭氏陰性菌刺激時CXCL17的表達水平增高顯著,初步證實腸道受到革蘭氏陰性菌的感染時高表達CXCL17,進而發(fā)揮著抗菌作用,此外推測革蘭氏陰性菌區(qū)別于革蘭氏陽性菌的特有成分——脂多糖對于CXCL17的誘導發(fā)揮著主要作用。接著提取了大腸桿菌的脂多

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