金錢草總黃酮的提取、純化及分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、金錢草系報春花科珍珠菜屬植物過路黃(LysimachiachristinaeHance)的新鮮或干燥全草,主產(chǎn)于四川、浙江等地。具有清熱利濕、通淋消腫等功能;用于黃疸、尿赤、肝膽結(jié)石等癥?,F(xiàn)代研究表明金錢草總黃酮具有預(yù)防草酸鈣結(jié)石形成和復(fù)發(fā)的作用,另外還有顯著的抗炎作用,增加冠脈血流量等。但在《中國藥典》2005版中,缺少對金錢草質(zhì)量優(yōu)劣的評價,本文以金錢草的主要有效成分為依據(jù),利用高效液相色譜法對主要有效成分進行了含量測定,從而判定金

2、錢草的質(zhì)量。 金錢草中主要含有黃酮類成分,據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報導(dǎo),異鼠李素、山奈酚、槲皮素是金錢草總黃酮中的常見成分。本次試驗設(shè)計是首先從利用微波萃取和大孔樹脂色譜提取并純化金錢草總黃酮,然后利用高效液相色譜對其中槲皮素和山奈酚進行定量分析,從而判斷金錢草的質(zhì)量。 本次實驗首先采用正交試驗設(shè)計優(yōu)選出微波萃取金錢草總黃酮的最佳工藝條件:即50%乙醇8倍量,于60℃條件下萃取30min。同時考慮了溶劑濃度,固液比,溫度和提取時間對提

3、取效果的影響??疾斓膸讉€影響中,溶劑的濃度對結(jié)果的影響最大,其次是提取的溫度,而提取時間和固液比對結(jié)果的影響較小,可以根據(jù)實際條件和需要選擇。采用微波萃取金錢草總黃酮,平均黃酮含量為5.58%,而采用傳統(tǒng)的乙醇回流法提取的提取率只有3.09%,微波萃取法的效率要高80%以上。而且時間短,溶劑省,效果好。 為進一步純化金錢草總黃酮,我們以飽和吸附量、回收率和純度作為考察指標(biāo),綜合比較了D101、AB-8、NKA-9三種大孔樹脂對金

4、錢草總黃酮的吸附分離性能。研究表明,NKA-9(極性)樹脂的綜合表現(xiàn)要優(yōu)于D101(非極性)和AB-8(弱極性)樹脂。NKA-9樹脂對金錢草總黃酮的飽和吸附量為51.2mg·g-1,洗脫率為96.5%。經(jīng)實驗研究,NKA-9純化金錢草總黃酮的最佳工藝條件為:上樣濃度20mg·mL-1,6倍量純水洗滌,50%乙醇洗脫。經(jīng)NKA-9型樹脂吸附分離后,總黃酮純度可達(dá)60.8%,樹脂可反復(fù)使用4次。 本文還探討了NKA-9型大孔樹脂分離

5、純化金錢草總黃酮的動力學(xué)過程,繪制了滲漏曲線和洗脫曲線來描述動態(tài)吸附-洗脫過程,并建立了此方程的數(shù)學(xué)方程:y=u(1-e-kx)。吸附與洗脫的過程十分復(fù)雜,此曲線和方程能大致描繪了3個步驟:流動相向樹脂顆粒的滲透過程;有效成分與樹脂顆粒間的吸附與解吸附過程;吸附-解吸附過程趨于平衡。 經(jīng)過純化后的金錢草總黃酮通過HPLC對其中的槲皮素和山奈酚進行了含量測定。經(jīng)實驗研究,最佳的含量測定工藝如下:Nova-PakC18柱上對目標(biāo)化合

6、物的甲醇溶液進行洗脫,流動相選用甲醇-水-磷酸(500:500:1),25℃下流速為1ml/min進行洗脫,槲皮素的保留時間大約在5.1min左右,山奈酚的保留時間約在8.8min左右,檢測波長為360nm。 實驗結(jié)果表明,槲皮素和山奈酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線都具有良好的線性關(guān)系(r2>0.999),而且線性范圍均比較寬。兩種成分的精密度的RSD分別為0.31%和0.27%,平均回收率在101~105%范圍內(nèi)。在重復(fù)性實驗中,兩者的RSD分

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