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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探討SEMA3G對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響,從而為惡性膠質(zhì)瘤遷移、侵襲機(jī)制提供新的理論依據(jù),為臨床治療和控制膠質(zhì)瘤侵襲提供新的思路。
方法:1.應(yīng)用脂質(zhì)體2000將pEGFP-N1-SEMA3G及pEGFP-N1轉(zhuǎn)染至人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中后,在G418篩選壓力下,用有限稀釋法挑取單個(gè)GFP陽性細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增,RT-PCR、蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)SEMA3G mRNA和蛋白表達(dá)水平及分泌情況;2.用刀片刮
2、除實(shí)驗(yàn)、Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)及明膠酶譜試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲能力。
結(jié)果:1.RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)結(jié)果顯示,在G418的篩選壓力下,單個(gè)GFP陽性細(xì)胞來源的細(xì)胞SEMA3G mRNA及蛋白穩(wěn)定表達(dá),其水平明顯高于GFP空載體轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染組;并且穩(wěn)定表達(dá)SEMA3G細(xì)胞的培養(yǎng)基SEMA3G分泌蛋白含量明顯高于GFP空載體轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染組;2.穩(wěn)定表達(dá)SEMA3G的細(xì)胞的遷移能力及侵襲明顯低于GFP空載體
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