1、目的：1．研究結(jié)核分枝桿菌H37Ra免疫小鼠后產(chǎn)生的特異性細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答。2．評價結(jié)核分枝桿菌H37Ra免疫小鼠對結(jié)核分枝桿菌毒株攻擊的免疫保護(hù)性。 方法：1．BALB/c小鼠隨機分為3組：H37Ra組、BCG組和NS組，分別用H37Ra、BCG和NS皮內(nèi)注射，免疫后第6w，做小鼠PPD遲發(fā)型超敏反應(yīng)實驗。2．第8w處死部分小鼠，測定小鼠臟器重量指數(shù)；肺組織病理學(xué)檢測。3．分離小鼠外周血血清，ELISA法測定血清特異性I

2、gG抗體的水平。4．流式細(xì)胞分析儀檢測小鼠脾淋巴細(xì)胞亞群的變化。5．取小鼠脾淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)并用PPD刺激，ELISA法檢測培養(yǎng)上清液中IFN-γ和IL-4的產(chǎn)生水平；MTT法檢測脾淋巴細(xì)胞的刺激指數(shù)(SI)。6。免疫后第8w，用5×10<'6>CFU MTB毒株H37Rv經(jīng)小鼠腹腔注射，4w后處死小鼠，測定小鼠臟器重量指數(shù)。7．取稀釋小鼠脾臟、肝臟和肺臟勻漿接種于改良羅氏培養(yǎng)基，培養(yǎng)21d后計數(shù)CFU。8．同時取肺組織做病理學(xué)檢查。

3、 結(jié)果： 1．H37Ra免疫小鼠后能誘導(dǎo)顯著的遲發(fā)型超敏反應(yīng)，以24h為最佳觀測時間。 2．免疫小鼠8w后，肝、肺、脾、腎臟器重量指數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義；病理學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)H37Ra免疫小鼠后肺組織無明顯改變。 3．H37Ra免疫小鼠血清中抗PPD IgG抗體的水平顯著升高。 4．H37Ra免疫小鼠脾臟CD3<'+>T細(xì)胞的百分率為(41.63±1.68)％，顯著高于NS對照組(38.44±1.87)％

4、(P<0.05)；H37Ra免疫小鼠脾臟CD3<'+>T細(xì)胞、CD4<'+>T細(xì)胞及CD8<'+>T細(xì)胞的百分率均不同程度地高于BCG免疫小鼠，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。各組間脾臟CD4<'+>T細(xì)胞、CD8<'+>T細(xì)胞、CD4<'+>T/CD8<'+>T比值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 5．脾淋巴細(xì)胞SI、IFN-γ和IL-4水平檢測發(fā)現(xiàn)H37Ra 免疫組顯著高于NS對照組(P<0.05)；H37Ra免疫組略高于BCG免疫

5、組。 6．感染4w后H37Ra和BCG組小鼠肝、肺、脾、腎臟器重量指數(shù)較NS對照組均顯著降低(P<0.05)，但H37Ra和BCG組間小鼠各臟器重量指數(shù)均無顯著性差異(P>0.05)。 7．H37Ra組小鼠肺、脾、肝組織荷菌量與NS對照組比較分別下降0.954、1.228和0.883log<,10>CFU，差異有顯著性(P<0.05)。H37Ra組各臟器組織荷菌量與BCG組之間差異均無顯著性(P>0.05)。 8