1、第一部分共培養(yǎng)hAMSCs向肝樣細(xì)胞分化體系建立與基因表達(dá)譜分析
　　 目的：建立非接觸式共培養(yǎng)誘導(dǎo)人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(human amniotic mesenchymalstem cells，hAMSCs)分化為人肝樣細(xì)胞的培養(yǎng)體系，比較不同誘導(dǎo)體系與hAMSCs誘導(dǎo)前后基因及蛋白表達(dá)的差異。
　　 方法：采用機(jī)械分離和二酶消化法培養(yǎng)hAMSCs，流式細(xì)胞儀術(shù)和免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定hAMSCs，非接觸式共培養(yǎng)和細(xì)胞因子誘導(dǎo)

2、hAMSCs向肝樣細(xì)胞分化，細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，糖原、油紅染色及免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定肝樣細(xì)胞，ELISA法檢測白蛋白含量，基因芯片檢測各組細(xì)胞基因表達(dá)水平異同。
　　 結(jié)果：第3、4代hAMSCs表達(dá)CD44、CD29、CD73、CD166和CD49d，高純度表達(dá)波形蛋白，基本不表達(dá)CD34和CD45。第4代hAMSCs與正常肝細(xì)胞系HL-7702非接觸式共培養(yǎng)，HGF和bFGF-2誘導(dǎo)培養(yǎng)hAMSCs，21d后，可見多角形細(xì)胞呈非

3、典型的巢狀排列，糖原染色陽性，油紅染色可見較多脂滴存在，與未誘導(dǎo)hAMSCs比較，所誘導(dǎo)肝樣細(xì)胞表達(dá)HNF-3β明顯增高，而CK-18改變不明顯，共培養(yǎng)誘導(dǎo)組肝樣細(xì)胞表達(dá)甲胎蛋白增加。hAMSCs和誘導(dǎo)的肝樣細(xì)胞，胞漿均表達(dá)白蛋白，但細(xì)胞培養(yǎng)液中未檢測到白蛋白。在10類88個(gè)基因的檢測中，發(fā)現(xiàn)共培養(yǎng)體系誘導(dǎo)的肝樣細(xì)胞與未誘導(dǎo)的hAMSCs之間存在13個(gè)基因的表達(dá)差異；共培養(yǎng)和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的肝樣細(xì)胞之間也存在12個(gè)基因的表達(dá)差異；未誘導(dǎo)的