1、目的：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是存在于骨髓中的一種具有跨胚層分化潛能的干細(xì)胞。近年來研究發(fā)現(xiàn)其可在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)存活并能分化為神經(jīng)樣細(xì)胞，在體外也可通過誘導(dǎo)向神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，并對(duì)腦缺血、腦外傷等疾病的神經(jīng)功能的缺損有改善作用。其取材方便、體外擴(kuò)增迅速且能以多種途徑移植包括靜脈移植、腦內(nèi)移植。故骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷修復(fù)中的臨床應(yīng)用前景廣闊。本研究目的就是探討人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離和體外培養(yǎng)擴(kuò)增的方法，通過觀察細(xì)胞形態(tài)、貼壁生長(zhǎng)特性、

2、細(xì)胞表型等對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行鑒定，研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性。 方法：采集健康成人骨髓血，通過密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)得到較純化的MSCs，使用含有10﹪胎牛血清的低糖DMEM繼續(xù)培養(yǎng)擴(kuò)增MSCs。通過觀察細(xì)胞形態(tài)、貼壁生長(zhǎng)特性，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞CD29、CD34、CD45的表達(dá)，對(duì)培養(yǎng)的MSCs進(jìn)行鑒定。觀察MSCs的細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)速度、繪制MSCs的生長(zhǎng)曲線。凍存復(fù)蘇MSCs后觀察其存活率和生長(zhǎng)狀態(tài)等。

3、 結(jié)果：應(yīng)用國產(chǎn)淋巴細(xì)胞分離液及胎牛血清，通過密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法可以獲得較純化的MSCs；經(jīng)原代和傳代培養(yǎng)得到擴(kuò)增，早期生物性狀穩(wěn)定。通過本方法培養(yǎng)的MSCs細(xì)胞呈現(xiàn)典型的梭形形狀，旋渦狀排列、貼壁生長(zhǎng)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞CD29表達(dá)陽性，CD34、CD45表達(dá)陰性，符合MSCs的特征。觀察細(xì)胞生長(zhǎng)特性發(fā)現(xiàn)，MSCs呈貼壁生長(zhǎng)，原代培養(yǎng)9-12d可以達(dá)到90﹪融合，傳代后的MSCs增殖速度較原代培養(yǎng)明顯增快。第3代的MSCs已