1、目的：通過檢測增齡過程中小鼠胸腺組織結(jié)構(gòu)、Notch通路信號因子基因表達(dá)及淋巴細(xì)胞亞群的變化情況，分析小鼠年齡增長與胸腺各種變化之間的關(guān)系，從而探討免疫與衰老的關(guān)系，并為下一步觀察寧夏無果枸杞芽提取物對自然衰老小鼠胸腺 Notch通路信號因子與淋巴細(xì)胞分化的影響提供理論和實驗依據(jù)。
　　方法：選取2周齡、4周齡、6周齡、8周齡、16周齡、24周齡健康雄性 C57小鼠，分為6組，每組15只。利用胸腺指數(shù)、HE染色觀察增齡過程中小鼠胸

2、腺的變化；應(yīng)用實時熒光定量 PCR法檢測增齡過程中小鼠胸腺細(xì)胞 NotchⅠ、PSⅠ、PSⅡ、HES-Ⅰ基因表達(dá)的變化；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測增齡過程中小鼠胸腺淋巴細(xì)胞亞群分化的情況。
　　結(jié)果：1、隨著年齡增加，小鼠胸腺指數(shù)逐漸減小，24周齡小鼠胸腺指數(shù)最小，與其它各周齡組比較，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；2、HE染色顯示，2、4、6周齡小鼠胸腺組織結(jié)構(gòu)正常，各組間變化不大，8周齡胸腺皮質(zhì)變薄，16周齡胸腺開始萎縮，24周齡胸腺萎

3、縮程度加深，表現(xiàn)為：皮質(zhì)變薄，細(xì)胞稀疏、散亂分布，皮質(zhì)與髓質(zhì)交叉現(xiàn)象嚴(yán)重，皮髓質(zhì)界線消失；3、熒光定量PCR結(jié)果顯示，小鼠胸腺細(xì)胞NotchⅠ、PSⅠ、PSⅡ、HES-Ⅰ基因 mRNA的表達(dá)均呈隨年齡增大表達(dá)量增加的趨勢，24周齡表達(dá)量減少，與前面幾組相比，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；4、流式細(xì)胞結(jié)果顯示，隨年齡增長，小鼠胸腺內(nèi) CD4+CD8+細(xì)胞比例減少，CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞比例呈上升趨勢，24周齡降至最低，與前面幾組相比

4、，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），2、4、6、8周齡胸腺 CD4+/CD8+比值逐漸增加，16周齡開始下降，24周齡降至最低，與前面幾組相比，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），CD28分子的表達(dá)呈上升趨勢，24周齡開始下降，與前面幾組相比，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。5、對 Notch信號因子基因表達(dá)和T細(xì)胞亞群比例進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)24周齡前的階段 NotchⅠ、PSⅠ、PSⅡ、HES-Ⅰ與CD4+CD8+雙陽性細(xì)胞及CD4+單陽性細(xì)胞

5、無相關(guān)性，與CD8+呈正相關(guān)。
　　第二部分寧夏無果枸杞芽提取物（FLE）對小鼠Notch通路信號因子的表達(dá)及淋巴細(xì)胞亞群分化的影響
　　目的：本實驗通過觀察給予寧夏無果枸杞芽提取物前后各組小鼠胸腺指數(shù)、胸腺結(jié)構(gòu)、小鼠胸腺淋巴細(xì)胞亞群及 Notch通路信號因子 NotchⅠ、PSⅠ、PSⅡ、HES-Ⅰ表達(dá)的變化，明確 FLE對小鼠胸腺結(jié)構(gòu)、胸腺淋巴細(xì)胞亞群分化的影響及與 Notch通路的關(guān)系，探討 FLE影響免疫衰老的可能的

6、機(jī)制，為寧夏無果枸杞芽抗衰老研究提供實驗依據(jù)。
　　方法：將60只24周齡健康雄性 C57小鼠隨機(jī)分為4組：空白對照組、FLE低劑量組、FLE中劑量組和FLE高劑量組，每組15只。分別用質(zhì)量/體積百分比為4％、8%、16%FLE灌胃，0.2 mL/（10 g·d）)，空白對照組等量生理鹽水灌胃，連續(xù)8周。灌胃結(jié)束后，處死小鼠并取材，HE染色觀察各組小鼠胸腺結(jié)構(gòu)、應(yīng)用實時熒光定量 PCR檢測各組小鼠胸腺細(xì)胞 NotchⅠ、PSⅠ、P

7、SⅡ、HES-Ⅰ基因的表達(dá)、應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠胸腺淋巴細(xì)胞亞群的分化情況。
　　結(jié)果：用寧夏無果枸杞芽提取物灌胃小鼠8周后，無果枸杞芽中、高劑量組可明顯改善胸腺萎縮和結(jié)構(gòu)的退化；PCR法檢測顯示：無果枸杞芽灌胃組小鼠胸腺組織NotchⅠ、PSⅠ、PSⅡ、HES-Ⅰ基因的表達(dá)量降低；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：寧夏無果枸杞芽對 CD4+CD8+雙陽性細(xì)胞的改變不明顯，可明顯升高 CD4+單陽性細(xì)胞比例，同時降低CD8+單陽性細(xì)胞比例，升

8、高CD4+/CD8+比值，增加CD28分子的表達(dá)。
　　結(jié)論：本實驗結(jié)果顯示寧夏無果枸杞芽提取物可明顯改善小鼠胸腺萎縮狀況，能夠降低NotchⅠ、PSⅠ、PSⅡ、HES-Ⅰ基因的表達(dá)量，增加CD4+單陽性細(xì)胞分化的同時抑制 CD8+單陽性細(xì)胞分化，升高 CD4+/CD8+比值，提示寧夏無果枸杞芽可改善衰老所致胸腺萎縮，與無果枸杞芽提取物增加 CD4+單陽性細(xì)胞分化，抑制 CD8+單陽性細(xì)胞分化，升高 CD4+/CD8+比值，維持