1、乳腺癌是女性常見的一種惡性腫瘤，對婦女的生命健康影響很大，乳腺癌在中國多個城市的發(fā)病率已居女性惡性腫瘤的前兩位。
　　 腫瘤干細(xì)胞為腫瘤組織內(nèi)很少數(shù)擁有干細(xì)胞特性的細(xì)胞，可以自我更新，腫瘤干細(xì)胞的形成一般認(rèn)為是由機(jī)體自身的正常干細(xì)胞受到各種內(nèi)外刺激因素的作用轉(zhuǎn)化而來。某些腫瘤發(fā)生可能是機(jī)體干細(xì)胞因為多基因突變而使其自我更新的過程出現(xiàn)異常，干細(xì)胞的生長調(diào)控出現(xiàn)紊亂，停滯在分化的某個時期無限增殖而產(chǎn)生的。腫瘤中的腫瘤干細(xì)胞的存在決定

2、了腫瘤的生物學(xué)性狀和病人的預(yù)后。
　　 近年來，乳腺癌干細(xì)胞的研究有了較為矚目的進(jìn)展，乳腺癌為腫瘤干細(xì)胞相關(guān)疾病得到了廣泛認(rèn)可。雖然不同病人乳腺癌的形態(tài)組織學(xué)、臨床表現(xiàn)、生物學(xué)性狀各異，但都與乳腺腫瘤干細(xì)胞有著密不可分的關(guān)系。2003年，Al-Hajj第一次利用NOD/SCID試驗用小鼠乳腺脂肪墊內(nèi)移植的方法和流式細(xì)胞檢測分析，在人類原發(fā)性乳腺癌和乳腺癌轉(zhuǎn)移性胸水滲出液中分離出了CD44+/CD24-/low細(xì)胞，它們具有分化潛

3、能而且可以自我更新，100個此標(biāo)志的細(xì)胞就可以在裸鼠上形成腫瘤，而其它類型的腫瘤細(xì)胞則往往需數(shù)萬個才能形成腫瘤。從乳腺癌實體瘤中鑒定了腫瘤干細(xì)胞。
　　 Oct4也被稱為POU5F1或Oct3，常在全能性的胚胎細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，對胚胎早期的發(fā)育階段有特異作用。Oct4在原始生殖細(xì)胞、小鼠植入前胚胎、卵母細(xì)胞、原腸胚的外胚層和胚胎干細(xì)胞上有表達(dá)，可是其經(jīng)過分化的子代細(xì)胞中卻沒有Oct4的表達(dá)，提示Oct4和細(xì)胞的多能性分化有緊密的聯(lián)系。

4、Oct4可能為一個特異分化全能性的關(guān)鍵基因，它標(biāo)志著細(xì)胞有分化全能性，所以細(xì)胞如果表達(dá)Oct4基因一般即為潛在的多能性干細(xì)胞，這些細(xì)胞有可能作為起始細(xì)胞導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生。
　　 Sox2屬于sox(SRY-related HMG box)家族，所有sox家族成員的共同表現(xiàn)特點是含有一個保守程度很高的HMG box DNA結(jié)合域。Sox2可以和靶基因的HMG結(jié)構(gòu)域特異結(jié)合，在維持干細(xì)胞多能性的方面發(fā)揮極其重要的作用。Sox2可以影響

5、細(xì)胞的命運和胚胎的發(fā)育，它調(diào)控著神經(jīng)干細(xì)胞，胚胎干細(xì)胞的自我更新、分化等過程。
　　 Al-Hajj分離出了CD44+/CD24-/low細(xì)胞，它們具有分化潛能而且可以自我更新，這種細(xì)胞既可產(chǎn)生其它表型的細(xì)胞又可自我復(fù)制。Fillmore CM等也發(fā)現(xiàn)幾種乳腺癌細(xì)胞系中的CD44+/CD24-/low細(xì)胞具有類似干細(xì)胞的特性比如耐藥、多方向分化、自我更新。CD44+/CD24-/low細(xì)胞作為乳腺癌干細(xì)胞的標(biāo)志已得到公認(rèn)。

6、>　　 乳腺癌基因亞型是根據(jù)特異基因的表達(dá)情況來對乳腺癌進(jìn)行分型的新觀點，此分類方法在預(yù)測乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險、評價治療效果和判斷患者生存預(yù)后等方面較傳統(tǒng)的方法（主要依據(jù)腫瘤體積大小、組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等）更為準(zhǔn)確。乳腺癌被分為Luminal A、Luminal B、HER-2過表達(dá)、Basal-like和Normal-like五個基因亞型，每種基因亞型的臨床表現(xiàn)、預(yù)后和治療方法都有很大的不同。研究表明Luminal A與Lu

7、minal B型對化療的敏感性相對較低；HER-2過表達(dá)型乳腺癌的患者對化療的敏感性較高；Basal-like型對術(shù)前化療的敏感性最高。在預(yù)后比較上，Luminal A和Normal-like較好，Luminal B其次，HER-2過表達(dá)型預(yù)后效差，Basal-like型預(yù)后最差。各基因分型乳腺癌干細(xì)胞的比例、干細(xì)胞標(biāo)志的表達(dá)水平有何不同?不同乳腺癌基因類型生物學(xué)行為的差別是否與其腫瘤干細(xì)胞含量的不同有關(guān)?這些問題目前國內(nèi)外研究較少。本

8、實驗主要觀察腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志Sox2，Oct4蛋白與CD44+/CD24-/low標(biāo)記的乳腺癌干細(xì)胞在乳腺癌各種基因分型中的表達(dá)及其意義，以期從腫瘤干細(xì)胞角度對各亞型腫瘤組織的生物學(xué)行為進(jìn)行初步探討。
　　 材料和方法：
　　 根據(jù)患者乳腺癌組織的HER-2、ER、PR的情況，將120例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌病例分為LuminalA45例(37.5％)、LuminalB29例(24.2％)、HER-2過表達(dá)27例(22.5％)和

9、ER-，PR-，HER-2-型乳腺癌19例(15.8％)。采用免疫組織化學(xué)法檢測120例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中Sox2、Oct4的表達(dá)；采用免疫組化雙標(biāo)法檢測CD44+/CD24-/low乳腺癌細(xì)胞在乳腺癌各基因分型中的比例。統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS13.0軟件行x2檢驗，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用spearman分析檢測相關(guān)性，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1．CK5/6陽性表達(dá)一般都在細(xì)胞質(zhì)中，陽性信

10、號為棕黃色。對ER-，PR-，HER-2-型乳腺癌做CK5/6抗體的免疫組化可以明確此型是否為基底細(xì)胞來源。本實驗中共有19例呈現(xiàn)(ER-，PR-，HER-2-)表型，經(jīng)加作基底細(xì)胞型細(xì)胞角蛋白CK5/6染色，均為陽性表達(dá)，符合Basal-like型乳腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。
　　 2．Oct4蛋白陽性表達(dá)的部位主要在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核，在乳腺癌組織之中呈陽性表達(dá)時癌細(xì)胞核染成棕黃色，陽性細(xì)胞可呈密集點狀分布偶有彌漫分布。從Luminal

11、 A、 Luminal B、 HER-2過表達(dá)到Basal-like，Oct4表達(dá)的陽性率依次上升(31.1％、34.5％、66.7％、89.5％)(x2=27.668，P＜0.001)。乳腺癌Basal-like基因型組織中的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物Oct4蛋白陽性率明顯高于其他三種基因型；Luminal A型腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物Oct4蛋白陽性率最低。
　　 3．Sox2蛋白陽性表達(dá)的部位也主要在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核，在乳腺癌組織之中呈陽性

12、表達(dá)時癌細(xì)胞核染成棕黃色。陽性細(xì)胞可呈密集點狀分布偶有彌漫分布。Sox2的陽性率亦依次上升(13.3％、62.1％、81.5％、84.2％)(x2=50.737，P＜0.001)。乳腺癌Basal-like基因型組織中的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物Sox2蛋白陽性率明顯高于其他三種基因型；Luminal A型腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物Sox2蛋白陽性率最低。
　　 4.120例乳腺癌組織中，Oct4與Sox2的表達(dá)從Luminal A、Luminal

13、 B、HER-2過表達(dá)到Basal-like型均呈上升趨勢，乳腺癌組織中Oct4與Sox2表達(dá)具有顯著正相關(guān)(r=0.506;P＜0.001)
　　 5．CD44為胞膜或胞質(zhì)著色，陽性信號為紅色，CD24為胞膜或胞質(zhì)著色，陽性信號為棕褐色。120例乳腺癌中CD44+/CD24-/low細(xì)胞在不同的乳腺癌基因分型中的表達(dá)Luminal A型為64.4％，Luminal B型為65.5％，HER-2過表達(dá)型為55.6％，Basal-

14、like型為73.7％。從實驗結(jié)果可以得出CD44+/CD24-/low細(xì)胞數(shù)量與乳腺癌基因分型沒有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(x2=1.644,P=0.65)(P＞0.05)。
　　 6．Oct4和乳腺癌患者的年齡有關(guān)(x2=16.59，P＜0.001)和腫瘤大小有關(guān)（x2=12.006，P＜0.001）與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移并無明顯相關(guān)（x2=0.001，P=0.975）(P＞0.05)。
　　 7．Sox2和乳腺癌患者的年齡有關(guān)(x2=

15、24.848，P＜0.001)和腫瘤大小有關(guān)（x2=17.614，P＜0.001）與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移并無明顯相關(guān)(x2=0.083，P=0.773)(P＞0.05)。
　　 8．CD44+/CD24-/low細(xì)胞和乳腺癌患者的年齡沒有相關(guān)性(x2=2.415，P=0.120)(P＞0.05)和腫瘤大小沒有相關(guān)性(x2=0.946，P=0.331)(P＞0.05)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都沒有相關(guān)性(x2=1.029，P=0.310)（P＞0.05

16、）。
　　 結(jié)論：
　　 1．惡性度高的乳腺癌基因亞型具有更多干細(xì)胞特征的腫瘤細(xì)胞。提示乳腺癌各基因亞型的臨床表現(xiàn)和預(yù)后的差別源自于其腫瘤干細(xì)胞含量的差別。
　　 2．乳腺浸潤型導(dǎo)管癌中Oct4和Sox2蛋白的表達(dá)具有顯著相關(guān)，提示Oct4和Sox2可能協(xié)同作用，共同對干細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行調(diào)節(jié)維持腫瘤干細(xì)胞自我更新以及多向分化能力。
　　 3．CD44+/CD24-/low細(xì)胞數(shù)量與乳腺癌基因分型無關(guān)。