1、尋常型銀屑病(PsV)是一種多基因遺傳背景下由T細(xì)胞介導(dǎo)的以Thl型細(xì)胞免疫應(yīng)答為主，多種致炎因子與樹突狀細(xì)胞共同參與的慢性炎癥性皮膚病。長期臨床觀察及研究發(fā)現(xiàn)感染，尤其是鏈球菌感染與銀屑病的發(fā)病密切相關(guān)，它很可能是觸發(fā)銀屑病病理性T細(xì)胞激活的始動因素。目前關(guān)于鏈球菌感染誘發(fā)銀屑病的研究主要集中于菌體蛋白成分，其機制尚未完全明了。除此以外，鏈球菌DNA是否參與銀屑病的發(fā)病至今尚未見報道。本課題圍繞PsV患者外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)

2、Toll樣受體的表達(dá)、鏈球菌CpG DNA對患者免疫細(xì)胞增殖活化及對角質(zhì)形成細(xì)胞生長周期的影響進(jìn)行研究，初步探討鏈球菌CpG DNA在PsV發(fā)病中的可能作用機制。 1、應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)觀察并比較了PsV患者和正常人PBMCs中與細(xì)菌感染相關(guān)的Toll樣受體(TLR2、TLR4、TLR9)的表達(dá)。結(jié)果顯示發(fā)病與感染相關(guān)的患者和發(fā)病與感染無關(guān)的患者以及正常對照比較，TLR9的表達(dá)水平在與感染相關(guān)的銀屑病患者中顯著升高，而

3、TLR2和TLR4的表達(dá)量在三組之間無顯著性差異，提示鏈球菌CpG DNA可能在感染誘發(fā)PsV的過程中起作用。 2、觀察并比較了DNA酶(DNase I)消化前后的鏈球菌抗原刺激Psv患者和正常人PBMCs后細(xì)胞增殖能力的變化。結(jié)果顯示，DNaseI消化后的鏈球菌抗原與全菌抗原比較，前者刺激PBMCs增殖反應(yīng)的能力明顯低于后者，且患者對鏈球菌DNA的反應(yīng)性比正常人高，表明鏈球菌DNA可能參與了鏈球菌感染誘發(fā)機體病理性免疫應(yīng)答的

4、過程。 3、分別使用鏈球菌全菌抗原(SA)及去除核酸成分的鏈球菌抗原(non-NASA)刺激患者和正常人PBMCs，24小時后采用流式細(xì)胞術(shù)檢測并比較總T細(xì)胞和CLA<'+>(皮膚淋巴細(xì)胞抗原)T細(xì)胞活化表達(dá)CD69<'+>的百分率。結(jié)果顯示，在PsV患者中non-NASA與SA比較，non—NASA刺激總T細(xì)胞和CLA<'+>T細(xì)胞活化表達(dá)CD69<'+>的百分率顯著低于SA，但在正常對照組中non-NASA與SA比較無顯著

5、性差異，兩者均不能激活正常人CLA<'+>T細(xì)胞。non-NASA聯(lián)合人工合成的CpG—A可明顯增加活化T細(xì)胞CD69<'+>的表達(dá)水平，但聯(lián)合CpG-B卻未出現(xiàn)CD69<'+>的表達(dá)增加。單獨使用CpG—A和CpG—B刺激患者PBMCs后均不激活T細(xì)胞表達(dá)CD69<'+>。 4、采用流式細(xì)胞術(shù)觀察了SA和non—NASA刺激患者PBMCs后24小時B細(xì)胞活化表達(dá)CD86<'+>的情況。結(jié)果顯示兩者均可活化B細(xì)胞表達(dá)CD86<'

6、+>但在表達(dá)率上兩者比較差異無顯著性。non—NASA聯(lián)合CpG—A和CpG-B后也可活化B細(xì)胞表達(dá)CD86<'+>，但聯(lián)合CpG-B后與non-NASA單獨刺激比較，B細(xì)胞活化表達(dá)CD86<'+>的百分率明顯增高；但non-NASA聯(lián)合CpG-A后與non-NASA比較無顯著性差異；單獨使用CpG—A和CpG-B刺激患者PBMCs后僅CpG-B可使B細(xì)胞活化表達(dá)CD86<'+>。 5、通過ELISA檢測患PBMCs經(jīng)SA或no

7、n-NASA刺激后IFN-γTNF-α的分泌水平的改變。結(jié)果為患者PBMCs在SA或non-NASA刺激后分泌IFN-γTNF-α的水平均有增高，但SA和non-NASA比較，無顯著性差異。 6、采用人工合成的CpG ODNs(CpG-A和CpG-B)刺激正常人PBMCs，24小時后將培養(yǎng)上清液作用于人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCaT細(xì)胞株)，觀察HaCaT細(xì)胞株細(xì)胞周期的變化。與空白對照組比較，CpG-A刺激正常人PBMCs后的

8、上清液抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的生長，而CpG-B對角質(zhì)形成細(xì)胞的生長周期無影響。 結(jié)論：TLR9的表達(dá)水平在與感染相關(guān)的銀屑病患者中顯著升高c鏈球菌在去除核酸成分后對患者PBMCs的增殖反應(yīng)及T細(xì)胞活化表達(dá)CD69<‘+>的水平明顯降低，但在加入人工合成的CpG-A后T細(xì)胞活化表達(dá)CD69<'+>的水平可以恢復(fù)；去除核酸成分的鏈球菌對患者B細(xì)胞活化表達(dá)CD86<'+>的水平無影響，但在加入人工合成的CpG-B后CD86<'+>的表達(dá)